二氮嗪对h2o损伤大鼠l6骨骼肌成细胞的作用及机制研究.pdf

目 录 中文摘要…………………………………………………………………．1 英文摘要………………………………………………………．．………．．4 研究论文二氮嗪对Hz02损伤大鼠L6骨骼肌成肌细胞的作用及机制 研究 前言…………………………………………………………………．8日IJ舌…………………………………………………………………．．芍 材料与方法…………………………………………………………9 结果…………………………………………………………………．2l多口刁≮…………………………………………………………………·二l 附图…………………………………………………………………24 附表…………………………………………………………………38 讨论…………………………………………………………………．41 结论…………………………………………………………………．46 参考文献……………………………………………………………47 综述P13K／Akt信号通路的促生存机制…………………………．51 致{射…………………………………………………………………………61 个人简历…………………………………………………………………62 中文摘要 二氮嗪对H202损伤大鼠L6骨骼肌成肌细胞的作用及机制研究 摘 要 目的：在我国缺血性心脏病的发病率逐年提高，并已成为当今人类 死亡的主要原因之一。目前干细胞移植入梗死区治疗缺血性心脏病已取得 较大进展，但其治疗效果受多种因素的制约。影响其治疗效果的重要因素 之一是移植入的干细胞的存活率低，研究表明，大量细胞在移植入受损心 肌后约70．80％在3天内死亡。提高移植干细胞的存活率，可以从两方面 入手，一是提高移植干细胞本身耐受恶劣环境的能力；二是改善移植的微 环境。本实验室前期研究采用过氧化氢体外诱导L6骨骼肌成肌细胞 (L6SKM)氧化应激损伤，观察应用二氮嗪预处理对过氧化氢氧化损伤 L6SkM的作用，初步观察表明二氮嗪预处理对氧化应激损伤的成肌细胞 具有保护作用，但具体机制不清。P13K／Akt通路的活化对细胞存活非常 重要。本实验体外建立成肌细胞氧化应激模型，继续研究二氮嗪对成肌细 胞的作用，并探讨其保护作用与P13K／Akt信号通路的关系。 方法： 1不同浓度H202对L6SkM的作用体外培养L6骨骼肌成肌细胞(L6 Skeletal 组(normalcontr01)，H202损伤组(H202group)，浓度分别为0．20、O．40、 检测各组细胞活力，摸索诱导H202氧化损伤的最佳浓度及时间，建立 L6SkM H202氧化应激损伤模型。 体外培 养L6骨骼肌成肌细胞(L6SkM)，实验分正常对照组(normal 损伤组(H202 group)： 在培养基加入终浓度为2009mol／L二氮嗪的同时分别加入终浓度为 中文摘要 的影响，摸索LY294002的适当浓度。 3DZ预处理对H202损伤L6SkM的作用体外培养L6SkM。实验分 正常对照组(normal contr01)，H202损伤组(H202 的培养基作用24小时)，DZ预处理组(在培养基中先加入终浓度为 2001maol／L二氮嗪的同时加入终浓度50 比色法检测各组细胞活性：HE染色观察细胞的形态学变化；激光共聚焦 显微镜观察各组细胞经JC．1染色的线粒体膜电位的变化。免疫细胞化学 结果： 及时间的增加细胞活力逐渐下降，我们选择引起细胞活力下降50％左右 的H202浓度0．40mmol／L作用24小时建立损伤模型。 无差异。 3流式细胞仪检测细胞凋亡率：与正常组比较，H202组的细胞凋亡率明显 11．53士0．25％；LY组的细胞凋亡率升高至31．95士2．06％但低于H202组。 4激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位的荧光变化：正常细胞具有较高的 膜电