核酸的制备及基因组文库的构建.ppt

相对于cDNA文库，基因组文库的优点： cDNA克隆只能反映着mRNA的分子结构，没有包括基因组的间隔序列， cDNA文库中，不同克隆的分布状态总是反映着mRNA的分布状态，即：高丰度mRNA的cDNA克隆，所占比例较高，分离基因容易；低丰度mRNA的cDNA克隆，所占比例较低，分离基因困难； 从cDNA克隆中，不能克隆到基因组DNA 中的非转录区段的序列，不能用于研究基因编码区外侧的调控序列的结构与功能。 基因组、cDNA文库的构建流程 组织 可克隆之DNA 载体 DNA cDNA mRNA 部分酶解DNA DNA长度分级 双链cDNA DNA与载体连接 引入宿主细胞 鉴定文库的完备性 扩增后供长期储存 筛选出所需要的克隆 基因组DNA文库的构建简图 限制性内切酶 基因组DNA 基因重组 转化细菌 体外包装 基因组文库构建步骤 一、基因组DNA的提取 染色体DNA、 质粒DNA 二、基因组DNA的不完全酶切 1. 根据实验需要选择合适的限制性内切酶 当识别序列为 4 个和 6 个碱基时，它们分别平均在每 256 个和 4096 个碱基中会出现一个识别位点（44=256，46=4096） 2. 分离目的酶切片段大小的确定 a) 克隆单个基因： 10 kb b) 克隆基因族： 20kb 3、克隆片段的大