常用分子生物学技术的原理及其应用解读.pptVIP

将PCR技术引入DNA序列测定，使测序工作大为简化，也提高了测序的速度； 待测DNA片段既可克隆到特定的载体后进行序列测定，也可直接测定。 PCR与其他技术的结合可以大大提高基因突变检测的敏感性 。 （四）DNA序列测定 （五）基因突变分析 逆转录PCR reverse transcription PCR，RT-PCR 是将RNA的逆转录反应和PCR反应联合应用的一种技术。 RT-PCR是目前从组织或细胞中获得目的基因以及对已知序列的RNA进行定性及半定量分析的最有效方法。 （一）逆转录PCR技术 三、几种重要的PCR衍生技术 * mRNA 5? AAAAAA n 3? mRNA 5? AAAAAA n 3? TTTTTT n 5? mRNA 5? cDNA 3? AAAAAA n 3? TTTTTT n 5? AAAAAA n 3? TTTTTT n 5? oligo dT 12-18 反转录酶 RNase H DNA 聚合酶 S1 核酸酶 3? cDNA TTTTTT n 5? AAAAAA n 3? TTTTTT n 5? 反转录合成cDNA 原位PCR in situ PCR 是在组织切片或细胞涂片上的单个细胞内进行的PCR反应，然后用特异性探针进行原位杂交，即可检出待测DNA或RNA是否在该组织或细胞中存在。 原位PCR方法弥补了PCR技术和