亚硝酸钠对h2荷瘤小鼠移植瘤上皮—间质转化的促进作用.pdf

SODIUM NITRITE IMPROVES EPITHELIAL-MESENCHYMAL TRANSITION OF HEPATOMA CELLS IN MICE BEARING H22 A Dissertation Submitted to the Graduate School of Henan University in Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Medicine By Xu hongrui Supervisor: Prof.Huangfu Chaoshen May, 2013 摘 要 目 的 研究亚硝酸钠（NaNO ）对H22 荷瘤小鼠肝癌细胞上皮-间质转化（EMT ） 2 的作用和缺氧诱导因子1α （HIF-1α）及活性氧在这一过程的表达。 方 法 （1）60 只昆明小鼠右侧腋下接种小鼠H22 肝癌细胞制作荷瘤小鼠，再将荷 瘤小鼠随机分为4 组：亚硝酸钠处理组分为高、中、低三个剂量组，每天分别灌胃给予 10、20 和 30 mg·kg− 1 亚硝酸钠，对照组给予等体积生理盐水，连续给药20 天。第 21 天处死。伊红苏木素染色观察移植瘤组织病理学改变；免疫组化、免疫荧光和 Western blotting 检测相关蛋白表达；比色法检测血清及移植瘤组织超氧化物歧化酶 （SOD）、过 氧化氢酶 （CAT ）活性及丙二醛 （MDA ）、亚硝酸盐含量。（2 ）30 只昆明小鼠腹腔接种 小鼠H22 肝癌细胞制作腹水瘤模型，随机分为2 组：亚硝酸盐处理组每天给予30 mg·kg− 1 亚硝酸钠，对照组给予等体积的生理盐水，隔天测量腹围，观察生存时间。 结 果 与对照组相比，10-30 mg·kg− 1 亚硝酸钠处理各组移植瘤的体积和重量没有明 显变化；肺转移率明显增加；癌细胞侵润周围的肌肉和筋膜；免疫组化、免疫荧光和 Western blotting 结果显示，细胞波形蛋白表达增强，E-钙粘素表达下降；肿瘤细胞呈现 出上皮-间质转化（EMT ）；随着亚硝酸钠剂量的增加，血清及组织中亚硝酸盐含量逐步 增加；肿瘤组织内超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT ）的活性下降，丙二醛 （MDA ）含量升高，而血清中这些指标无差别；免疫组化和Western blotting 结果显示 HIF-1α 表达升高。在 H22 腹水瘤实验中发现，亚硝酸钠处理组腹水比对照组严重；生 存时间明显缩短。 结 论1.亚硝酸钠促进H22 荷瘤小鼠移植瘤发生上皮-间质转化。 2.亚硝酸钠促进 EMT 发生的机制可能与亚硝酸盐诱导活性氧（ROS ）促进 HIF-1α 表达增加有关。 3.亚硝酸钠灌胃可以明显缩短H22 腹水瘤小鼠生存时间。 关键词：亚硝酸盐，H22 细胞，移植瘤，上皮-间质转化，活性氧，缺氧诱导因子1α， 腹水瘤 I ABSTRACT Objective This study is to determine the effect of sodium nitrite on the epithelial-mesenchymal transition in hepatoma cells in mice bearing