中药肝复康对实性肝纤维化大鼠细胞外基质及其相关因子的影响.pdfVIP

中药肝复康对实验性肝纤维化大鼠细胞外基质 及其相关因子的影响 硕士研究生：陈泓 指导教师： 贾玉杰 教授 专业名称： 病理学与病理生理学 摘 要 目的：观察肝复康作用实验性肝纤维化大鼠后血清细胞外基质标志 物(IV型胶原、III型前胶原、透明质酸、层粘连蛋白)的变化情况及与 细胞外基质降解与沉积有关的基质金属蛋白酶．2(MMP．2)和基质金属 蛋白酶抑制因子．2(TIMP．2)基因表达变化。以期深入探讨肝纤维化的 发生、发展及逆转过程机制，最终为临床诊断及改善肝纤维化的治疗现 状提供新思路。 方法：健康SD大鼠77只，将其随机分为J下常对照组(C)l0只，模 型组(M)l1只，模型对照组(MC)11只，低剂量治疗组(LT)l0只、 中剂量治疗组(MT)12只、高剂量治疗组(HT)12只，预防组(P)11 只。除正常对照组外，余鼠造模。皮下注射以橄榄油稀释的10％的四氯 2周，J下常对照组以同样方法皮下注射生 化碳，5ml／kg，每周两次，共l 理盐水。其中预防组于造模同时以312．5mg／kg．d剂量的肝复康煎剂(主 2周。高剂量治疗组、 要成分为丹参、黄芪、赤芍、白芍、柴胡等)灌胃1 1 中剂量治疗组、低剂量治疗组则于造模第9周后开始分别以325mg／kg． d、31 2周。以上各剂量 1．25mg／kg．dN量的肝复康灌胃1 2．5mg／kg．d、3 药物均溶于l0ml／kg的生理盐水中。正常对照组及模型对照组则以等容 量的生理盐水灌胃。第l2周末将模型组、预防组大鼠隔夜禁食，次日称 量体重后，以乙醚麻醉腹主动脉采血检测各项指标，处死大鼠，迅速取 出肝组织，从肝右叶的中部切取肝组织于．70℃冰箱保存用于RT．PCR。 第20周末将其余各组大鼠以同样方法处死，取出肝组织，备用。应用放 射免疫分析法检测大鼠血清样本中各项指标的变化情况(IV型胶原、III 型前胶原、透明质酸、层粘连蛋白)；采用RT—PCR法检测各组大鼠肝组 基因的表达情况，用Olympus显微摄像系统采集图片，用图像分析软件测 定其积分光密度(IOD)，以IOD值表示表达水平，对IOD值进行分析和比 较。 结果：l、模型组及模型对照组血清Ⅳ型胶原、III型前胶原、透明质 酸、层粘连蛋白含量较之正常对照组均有明显增高(P=0．000)，预防组 与正常对照组血清四项指标比较无显著差异(P0．05)。经不同剂量的 中药肝复康干预后，该四项指标血清值均有明显降低(P0．05)，并以 中剂量组作用效果最明显；2、基于RT．PCR和其IOD值检测得到的结 果提示：MMP．2和TIMP．2在正常对照组表达微弱，在肝脏纤维化模型 及模型对照组表达较正常对照组显著增强(P0．05)，经不同剂量的中 药肝复康治疗后表达均有明显降低(P0．05)，其中中剂量治疗组降低 水平最为显著，其表达水平基本恢复至正常大鼠相应表达水平，治疗效 果优于高剂量、低剂量。 结论：①中药肝复康具有较好的预防和治疗肝纤维化作用，并且以 中剂量作用效果最为明显，是较为合理的用药剂量。②中药肝复康可以 通过抑制胶原合成，减少ECM生成减轻大鼠肝纤维化程度。③中药肝复 康可能通过解除MMP一2的抑制因素而提高其活性，以促进胶原降解。④ 中药肝复康通过调控基因表达水平，抑制MMP-2和TIMP一2mRNA表达， 使MMP．2／TIMP．2趋于平衡，从而发挥其抗纤维化的作用。 关键词：实验性大鼠肝纤维化 肝复康 细胞外基质 MMP-2TIMP一2 2 Theinfluencesof ontheextracellular Ganfukang