小鼠淋巴细胞白病细胞株(l1210)及其克隆细胞生物学特性比较研究.pdfVIP

小鼠淋巴细胞白血病细胞株(L1210)及其 克隆细胞生物学特性比较研究 摘要 目的：小鼠进曼垫照鱼垒痘绳胞挂1210(L1210)，广泛应 用于肿瘤治疗药物的筛选及肿瘤机理探讨方面的研究。汜同一瘤 株自其建株以后，分散在世界各地，由不同机构保管，由于保种 措施和条件的不同，国内外已有文献报道不同来源的细胞株在细 胞核型、DNA含量及蛋白质分布等许多方面表现出了显著的差 异，因而导致同一瘤株实验结栗钓可比性和一致性下降歹本研究 旨在探讨如何筛选与L1210细胞株的生物学特性一致且更加稳 定的细胞株，并对其质量加以控制。 方法：根据Fdler和Kripke提出的肿瘤细胞群体异质性的实 验证据和理论，用单细胞克隆法可得到性质均一的克隆细胞株。 对北京市肿瘤所保存的L1210细胞株进行了克隆培养，从中筛 选出7株克隆，对这7株克隆的DNA含量，染色体数目，扫描 电镜表面结构，蛋白质分布等方面进行了比较研究。并从中选出 4株克隆，分别经腹腔和皮下接种DBA／2小鼠建立动物模型， 对其腹水的性质、致小鼠死亡的时间、肿瘤的生长情况，以及对 化疗药物环磷酰胺的治疗学反应性进行了比较研究；并用生物素 标记的eDNA探针，采用原位杂交法检测克隆细胞mRNA的表 达a， (结果 1．L1210细胞克隆的选择及其细胞特性研究 1．1L1210细胞克隆采用有限稀释法，对北京肿瘤所保存的 L1210细胞株进行克隆，根据体外生长情况，挑选出7株生长旺 盛的克隆株。 及L3E1l克隆细胞表面都有微嵴、．微皱褶，但是微嵴、微皱褶 疏密程度有所不同：L2C9的微嵴和微皱褶较为粗大且有丰富的 微绒毛；L3F9克隆细胞表面有大量的突起，突起的直径0．5～1．3 微米。 1．3染色体数目 肿瘤所L1210细胞的染色体数目从12条到78 条不等，主流范围在62．63条，主流染色体所占比例为21．6％； 染色体数目依次为48、58、64、66、62、63及58轴 1．4DNA含量测定流式细胞仪测定肿瘤所L1210细胞和7株 l及L3F9的 8．7、9．0及8．3 pg。 1．5免疫组化染色结果肿瘤所L1210细胞和4株克隆细胞对着 十种抗体免疫组化染色，其中肿瘤所L1210细胞及4株克隆细 100％反应 胞与单抗FIK-1呈100％细胞着色，而与单抗Cyclm 性反应，而克隆细胞L2C9、L2H7及L3F9反应呈阴性；对于其 它单抗，L1210细胞及4种不同克隆细胞反应均呈阳性，但反应 阳性率有所不同。 1．6SDS．PAGE电泳结果对肿瘤所L1210细胞株和不同克隆株 分别为22及19条带。 2．L1210细胞及4株克隆细胞生物学特性研究 2．1瘤细胞腹腔接种DBA／2小鼠的结果肿瘤所L1210细胞及4 株克隆细胞腹腔接种DBA／2小鼠，均能使小鼠生长腹水和致小 鼠死亡，但接种后第7天的腹水性质、腹水瘤细胞的浓度及致小 鼠死亡时间有所不同。 2．2瘤细胞皮下接种DBA／2小鼠的结果肿瘤所L1210细胞和4 株克隆细胞腋部皮下接种DBA／2小鼠，均能长瘤块，但瘤块生 长变化情况有所不同，肿瘤所L1210细胞和4株克隆细胞L3F9、 g； 1．5％及16．5％。对瘤 变异系数依次为24．2％：一25．3％、69．3％、1 重进行方差分析，肿瘤所Li210细胞第10天的瘤重较克隆细胞 一L2H8、L3E11有显著性差别，各克隆细胞之间亦有显著性差别。 各瘤株所致肿瘤瘤重变异系数，L3E11最小，L2H8最大。 2．3瘤细胞建立的DBA／2小鼠动物模型对CTX治疗的反应性肿 瘤所L1210细胞及4株克隆细胞皮下接种DBA／2小鼠，经CTX 治疗后，抑瘤率从大到小依次为克隆细胞L2H8(86．o％)、L3F9 (48．7％)，经方差分析4株克隆细胞的抑瘤率与肿瘤所细胞均有 显著性差异。 3．生物素标