小鼠着床丝氨酸白酶2的抗体制备及其在昆虫细胞中的表达.pdf

复旦大学研究生院黄萍 小鼠着床丝氨酸蛋白酶2的抗体制备及其在昆虫卸l胞中的表达 中文摘要 SerirleProteinase 为了研究小鼠着床丝氨酸蛋白酶2(Implantation 2， ISP2)的功能及其在胚泡着床中的作用机理，需要制备tSP2特异性抗体和分离 克隆抗血清。Westernblot和免疫组化证明该抗体有明显的专一性和组织特异性， 且ISP2在妊娠早期的小鼠子宫内膜腺上皮有特异性的高表达。ISP2抗体的获得 为进一步研究ISP2在着床中的功能奠定了基础。 由大肠杆菌表达体系表达的重组蛋白分离纯化十分困难且没有生物活性， 使得进一步研究ISP2在着床中的生理功能无法进行，故采用昆虫～杆状病毒细胞 表达系统(BEVS)表达ISP2基因以期获得糖基化的蛋白质。首先，构建了表达载 以重组病毒感染昆虫细胞表达外源蛋白，融合蛋白ISP2His6存在于细胞质，而重 blot中的 组蛋白rlSP2月云‘分泌到培养液中。SDS—PAGE考马斯亮蓝染色和Western 产物迁移行为较原核表达系统的产物滞后．表明产物分子具有糖基化修饰。 关键词：着床丝氨酸蛋白酶2；表达；纯化：抗体制备；昆虫一杆状病毒细胞 表达系统 复旦大学研究生院 黄萍 小鼠着床丝氨酸蛋白酶2的抗体制备及其在昆虫细胞中的表达 Abstract that to afair of sefine Seeing 2(ISP2)isrequired quantityimplantationproteinase roleof inthe the anti-ISP2antibodiesandto the ISP2 preparepolyclonal explore of recombinationshouldbechoseto processimplantation，thegene techniques was pGEX4T-2／ISP2 produceenough expressionplasmid proteins．First，the into DE3tO thefusion thentransferredE．coti constructed，and express protein GST-ISP2．The was theSDS preliminarilypurifiedusing expressedproduct Thenthe fusion GST-ISP2was the