小鼠肠上皮内淋细胞在应激性溃疡模型中细胞因子il-2tnfα分泌活性的变化.pdfVIP

中文摘要 }前 言 Lymphocytes， Intraepithelial 肠上皮内淋巴细胞(Intestinal iIEL)是存在于消化道粘膜上皮组织细胞间或上皮细胞与基底膜 相接处的一群异质性淋巴细胞，90％以上由CD3+T细胞组成。 ilEL是肠相关淋巴组织中最靠近消化道管腔的一群淋巴细胞，其 数量十分庞大。对iIEL的研究兴起于八十年代中期，研究表明 iIEL在细胞表型、亚群构成和TCRV区基因的取用等方面与存在 于胸腺、脾脏、淋巴结和外周血中的普通T淋巴细胞明显不同。特 别需要指出的是，尽管长期以来胸腺被认为是T细胞发育分化的 唯一场所，但越来越多的证据表明，某些iIEL亚群是在胸腺外(肠 道局部)发育成熟的，这是iIEL与普通T细胞的根本区别之处， 也是iIEL吸引研究者关注的主要原因之一。颟提取的ilEL具有 细胞毒活性、NK活性，能分泌多种细胞因子，在肠道抗感染免疫、 经口免疫耐受和调节肠粘膜上皮细胞功能等方面可能起到重要作 用。尽管取得了上述研究成果，但目前对ilEL的生理功能的认识 仍十分有限。人们对于iIEL在整个消化道粘膜免疫系统中的地位 以及非胸腺依赖的ilEL亚群是否具有特殊的生理功能了解不多， 研究者们正从不同角度寻找答案。 众所周知，应激是机体对意外性刺激发生的一种重要的生理 应答反应，可导致机体包括免疫系统在内的多个系统的功能变化。 但是到目前为止，有关应激条件下iIEL生物活性变化的研究报道 较少。近几年来，在国家自然科学基金的资助下，我们实验室就应 激刺激对ilEL某些生物活性的影响做了系列的研究。其目的在于 通过了解iIEL在应激这一复杂的生理过程中生物行为的变化，为 认识ilEL的生理功能提供线索。本论文为该研究项目的一部分， 此前我们已经先后观察了小鼠被给予水浸限制刺激诱发应激性溃 疡后，ilEL的总数和亚群构戒、对靶细胞(如肿瘤细胞)的杀伤活 性、对有丝分裂原(ConA)刺激的转化能力以及分泌细胞因子 IFN丫的活性的变化。为了对ilEL分泌的Thl型细胞因子在应激 反应中的变化有较为完整的认识，本论文在上述研究的基础上，对 小鼠应激性溃疡模型中ilEL的细胞因子I乙一z和TNFa分泌活性 的变化进行了动态检测。 材料与方法 我们将C57BL／6小鼠随机分为7组，其中6组为实验组，给 45、 予水浸限制刺激诱发应激性溃疡，分别在剌激后的第1、2…3 6日提取其ilEL；另外一组为正常对照组，不给予水浸限制刺激直 接提取ilEL。收集各组ilEL培养上清，用ELISA试剂盒 (Genzyme公司产品)检测各组培养上清中IL一2含量，并且分别用 生物学方法(结晶紫染色法)和ELISA法检测各组上清中TNFa 的水平。 实验结果 1．给予小鼠水浸限制刺激诱发应激性溃疡后第三天，ilEL培 养上清中IL-2的含量出现升高，第4天达到高峰(262．2士57．8 相比，接受刺激后第4到6天小鼠+ilEL培养上清中IL一2的含量 显著升高(PO．05)。 2．用生物学方法未能检出小鼠ilEL培养上清存在有TNF 活性，然而却发现该培养上清对L。。。细胞有促进增殖作用； ELISA方法检测应激性溃疡后各组ilEL培养上清中TNFa含量 与正常对照相比，也未见明显变化(Po．05)。 ·2· 讨 论 由上述实验结果可知，被给予水浸限制刺激诱发溃疡后，小鼠 IIEL分泌细胞因子IL一2的水平在一定时间内出现升高，与我们 已报道的IFNY分泌水平的动态变化极其相似。iIEL中IL一2和 IFNYmRNA的表达情况在受刺激后的相应时间内也与此两种细 胞因子的表达水平相一致(资料待发表)。这提示机体受到应激刺 激后，iIEL在一定时间内可产生较高水平的Thl型的细胞因子。 我们以前还曾报道，给予水浸限制刺激诱发