戊型肝炎重组疫恒河猴免疫保护的实验研究.pdf

中文摘要 戊型肝炎重组疫苗恒河猴免疫 保护的实验研究 硕士研究生：董敏 导师：孟继鸿教授 东南大学病原生物学和免疫学系 中文摘要 Evirus，HEY)引起的急性病毒性肝 戊型肝炎(HepatitisE，HE)是由戊型肝炎病毒(Hepatitis 炎，主要经胃肠道传播。我国先后曾发生多次HE流行，1986-1988年新疆南部因水源污染发生过世 z万人发病。近年来我国HE的发病率和死亡率早逐年上升趋 界上规模展人的HE暴发流行，约有1 势，己被列为冈HE发病和死亡而引起的经济负担最为严重的国家之一。为了有效控制HE，HE疫苗 已被世界卫生组织推荐为21世纪最优先发展的疫苗之一。 HEV主要分成4个基因型，研究报道显示我国主要以4型为主。目前HEV尚无成熟的组织培 养体系和经济、合适的小动物模型。难以制备传统的灭活疫苗或减毒活疫苗。因此，HE疫苗的矽f究 主要集中于基因工程疫苗和DNA疫苗上。但迄今为I卜，尚无HE疫苗批准上市。合适的免疫原对疫 苗的制备具有相当重要的作用。本实验室以往的研究将HEV的中和抗原表位定位丁二HEVORF2编 码蛋白c端的第452．617位氨基酸之问。在此基础上，我们发现第4基因型HEV p179可以在原核 系统中获得高效、可溶性表达。经动物实验表明，该蛋白吸附氢氧化铝佐剂后可诱导小鼠产生高滴 研究。 最好的疫苗评价途径就是接种易感动物，并进行病毒攻击，观测其保护效果。本研究中我们选 用了目前最常用于实验性感染HEV的恒河猴作为实验动物，将制备的重组蛋白HEVp179免疫恒河 79的保护效果。 猴，进行HEV攻击保护实验，观察HE候选疫茁p1 本研究分为以下二个部分： 一、 戊型肝炎重组疫苗恒河猴免疫保护的实验研究 吸附后，实验组每只左侧三角肌注射lmL相应剂量抗原，对照组每只注射lmL铝佐剂，免疫程序为 0、4、g周。末次免疫后4周，对照组和实验组每只猴均静脉注射lmL10％HE急性期患者粪便悬液 泻，伴精神萎靡等症状：攻毒后第3天3只猴均从粪便悬液中检测到HEvRNA。持续5周以上，最 U～184 长持续7周；攻毒后1周2只猴ALT升高，峰值达150U，持续3~4周；攻毒后l周衄清抗 ．HEV IgM阳转，2周后3只猴抗一HEV IgG阳转，第4周达到峰值。实验组6只猴在初次免疫后2周 抗一HEV lgG阳转，第钆5周达到峰值；免疫及攻毒后6只猴均无异常症状，ALT均正常；高剂量 组M7攻毒后l周子粪便中检测-至JJHEVRNA，持续3周，其余5只猴粪便HEVRNA始终阴性。实 验结果表明，HEV p179重组疫苗具有良好的免疫保护作用。 二， ELISA定量检潮猴血清抗．HEV lgG工作参比品的翻备及应用 壅查奎兰堡主堂垡堡兰 通过上述研究，我们推测HEV p179的免疫保护作用可能与其诱导的抗体滴度的高低有关。为 了方便抗体的定量检测和不同个体之间抗体滴度的相互比较，我们进一步开展了猴血清抗一HEVIgO 工作参比品的制备和应用的研究。 首先取不同猴不同时期的HEV p179免疫m清加50％甘油混合之后分装保存，将ELISA检测 过程中的所刚试剂以及程序标准化，以不同包被批次酶标条在不同时间检测该血清的抗一HEV