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应用ssh-pr技术进行混合血样str分型的初步研究

lIIII I I IillI I IIIIlllll Y1 ······1 ······3 ······6 ······7 ······9 ······13 ¨ ~ ~ ~ ● ¨~ 一 一 18 ~ ¨ ~ ~ ~ ● ¨~ 一 23 , 耔 性 ,, 24 的 自 我 平 价 ~ ~~● ¨ , 究文创献 一 25 四五六 , 讨结本参附 论论研考录 综述………………………………………………………………………27 致谢 ………………………………………………………………………36 个人简介…………………………………………………………………37 本所占的比例,基因型的组合,及待扩增样本的DNA总量,即混合样本DNA分 型的难易程度不尽相同。混合样本中较少成分所占的比例小于5%或1:19,通常 是无法检测到。AmpFlSTR试剂盒建议,混合样本中最少的成分应该大于35pg, 才能得到可靠的分型结果。提高混合样本中较少组分DNA分型成功率,是法医工 作者急需解决的难题之一,同时在医学遗传学领域也具有重要的研究价值。 Subtractive SSH)是1996年Diatchenko等以 SSH-PCR(SuppressionHybridization 抑制性PCR为基础、并结合标准化与消减杂交技术,建立的一项筛选与分离未知差 异表达基因的新技术。其基本过程是:抽提两种不同细胞的差异mRNA,反转录 成cDNA,再用限制性内切酶消化cDNA成平术端片段,将待研究的cDNA连接 接头后作为检测子,将另一cDNA作为驱动子进行两轮杂交,最后通过两次PCR 扩增得到差异表达的cDNA。该方法运用了杂交二级动力学原理,即丰度高的单 链DNA在退火时产生同源杂交的速度快于丰度低的单链DNA,从而使原来在丰 度上有差别的单链DNA相对含量达到基本一致。而抑制PCR则是通过利用链内 退火优于链间退火的特点,使两端接上具有反向末端重复序列的同一接头的非目 片段在退火时产生类似发夹的互补结构,无法作为模板与引物配对,从而选择性 地抑制非目的基因片段的扩增。在标准体系中,运用SSH进行一轮消减杂交,可富 集稀有序列1000倍以上,使某

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