猪圆环病毒iiorf2真核表达质粒构建及免疫抗体检测研究.pdfVIP

摘要 本研究采用本课题组分离鉴定的猪圆环病毒分离株PCV2。，设计一对引物，用PCR 234个氨基酸。 进行连接反应，转化大肠杆菌JMl09，酶切和PCR鉴定结果表明，成功构建了真核表达 用真核表达质粒pcDN卜PcV一0RF2免疫小鼠(第一次免疫后两周进行第二次免疫)， 用间接ELISA方法检测免疫抗体的结果表明，第一次免疫后一周产生抗体，二免后， 小鼠的抗体水平迅速上升，在第4周达到高峰，其后缓慢下降，可持续11周以上。 用PcR检测了pcDNA—Pc卜oRF2的机体组织器官中的动态分布。结果表明，首免后 3h到28d小鼠的各种组织器官中均能扩增出目的基因片段。在第44d脑组织PCR结果为 阴性，第58d能从血液、心脏及肌肉组织扩增出目的基因片段，基因片段在肌肉中的 存留时间达到88天以上。 提取小鼠各组织样品染色体基因组DNA进行PcR检测研究表明，纯化的染色体基因 组未扩增出条带，pcDNA-PCV—ORF2未整合到小鼠染色体上，证实了用真核表达质粒 pcDNA-PCV—ORF2免疫的安全性。 本研究为进一步研究猪圆环病毒核酸疫苗提供了科学依据。 关键词：猪圆环病毒、真核表达质粒(pcDNA-PCV—ORF2)、免疫抗体 本研究获得国家“十