猪细小病毒和猪狂犬病毒实时定量pcr检测方法的建立.pdf

摘 要 猪细小病毒病和猪伪狂犬病是危害养猪业发展的两大疫病，给养猪业造成巨大的经济损 失。目前，由于常规的免疫学检测方法耗时长、准确性低，普通PCR方法易出现假阳性结果 等原因，急需建立一种快速、准确、敏感的分子生物学检测方法，应用于分子流行病学调查 和实验室检测。实时定量PCR方法特异性强、敏感性高，它能够快速的测定样品中的病毒拷 贝数，定量准确。因此，建立实时定量PCR检测方法将对临床普查和实验室检测都具有重要 的意义。 本研究根据目的基因序列设计引物和探针，制各实时定量PCR试验的标准品。根据实时 定量PCR扩增曲线的ct值绘制标准曲线，建立了两种检澳rJNSl基因、91)基因和gE基因的实时 定量PCR方法。 将建立的Taqman探针的实时定量PCR方法进行了样品检测。在某养殖场采疑似病猪的 颈静脉血22份，结果在22份血液样品中普JI邑PCR方法检测到19份PPV感染呈阳性的样品， Taqman探针的实时定量PCR方法检测到有20份PPV感染呈阳性的样品，两种方法均检测出血 液样品中无PRv感染的样品：在另一养殖场采病猪的淋巴结组织8份，结果在8份组织样品普 通PCR方法和Taqman探针的实时定量PCR方法均检测出5份PRV感染呈阳性的样品，在这5 份样品中有4份野毒感染呈阳性的样品，3份PPV感染呈阳性的样品。以上结果