肿瘤睾丸抗原gge7基因的重组、表达、纯化及在肺癌血清学诊断的应用研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 肿瘤／睾丸抗原GAGE7基因的重组、表达、纯化 及在肺癌血清学诊断的应用研究 目 的 构建肿瘤／睾丸抗原GAGE7基因片断的真核表达载体，并转入酿酒酵母菌中 诱导表达及纯化，获得纯化蛋白，为该蛋白进一步的免疫学研究奠定基础；此外， 以此蛋白为包被抗原，通过间接ELISA法对肺癌患者血清中GAGE7抗体进行检 测，以期为GAGE可能作为恶性肿瘤血清学诊断的理想标记提供实验依据。 方法 用PCR法扩增肿瘤／睾丸抗原GAGE7的基因片断，将目的基因插入真核表达 筛选、琼脂糖电泳鉴定、内切酶鉴定及DNA测序筛选出正确的重组子，并将其转 分析鉴定，以找出最适诱导时间。按优化条件大量诱导的工程菌裂解后，上清液 过HIS．selectTMresincolumn亲和层析柱，获取纯化的His．GAGE7融合蛋白。同时， 本实验选取肺癌为代表，并以此纯化蛋白为包被抗原，通过间接ELISA法检测临 床肺癌患者血清中相应抗体，同时以健康人为阴性对照，最后结果进行统计学分 析。 多士 里