胰岛素、高血糖和神经肽y对初生犊牛原代培养肝细胞中硬脂酰coa去饱和酶mrna表达的影响.pdfVIP

胰岛素、高血糖素和神经肽Y对初生犊牛原代培养肝细 胞中硬脂酰CoA去饱和酶mRNA表达的影响 摘要 选用健康初生犊牛，采用双灌流的方法，成功分离犊牛肝脏细胞，通过测定培养 液中尿素合成能力、白蛋白分泌能力和乳酸脱氢酶的泄漏量等指标，检测细胞在分离 后损伤和修复情况，寻找神经内分泌激素处理的恰当时机。以含有目的基因的质粒为 模板，采用梯度稀释的方法，以SYBR greenI为荧光染料，检测p-actin和SCD两个 (scD)mRNA的相对变化。结果表明：1．离体双灌流法可以成功的分离犊牛肝细胞， 成活率均在90％以上，细胞合成尿素的能力、分泌白蛋白的能力随着培养时f司先减 少后增加，在培养到3～4天时乳酸脱氢酶泄漏明显减少，表明培养3,-4天后肝细胞 能够修复胶原酶带来的损伤，因此分离的肝细胞培养72h后，用作实验材料比较适合． 两个基因的扩展效率相同，可以用比较CT法计算SCDmRNA相对表达量。3．胰岛素 呈现剂量依赖性促进效应。4．胰高血糖素显著地抑制了肝细胞SCDmR．NA表达水平， 不同浓度组差异极显著(PO．01)，并呈现剂量依赖性抑制效应。5．神经肽Y促进肝 促进肝脏脂肪沉积。而