水貂犬瘟热病毒分离鉴定及其f基因的原核表达.pdf

摘 要 1．取一发病水貂的肝、脾、脑等组织研磨后用Vero和BHK细胞分离病毒，2-3代后 细胞产生了明显的CPE，电镜检查发现了典型的副粘病毒样粒子，大小约150nm。IFA 试验和RT-PCR检测均为阳性，证明分离毒是一株犬瘟热病毒。进～步研究显示：该 毒株的TCID50为10。487，对鹅、鸡、小鼠、家兔、山羊、猪红细胞均无凝集性。分离 株病毒对乙醚、氯仿敏感，不耐酸、不耐热，病毒的核酸型为RNA。将PCR得到的 貂分离株1493．89进行序列比较。结果显示水貂分离株与上述两株的核苷酸同源性分 别为98．6％、93．2％，氨基酸同源性为98．O％、95．9％。另外，从一狐狸犬瘟热疑似病 料组织中直接提取核酸，进行RT-PCR扩增，结果得到与预期扩增片段相符的核酸电 性分别为98，6％、94．6％，氨基酸同源性为98．O％、94．9％；与水貂分离株核苷酸同源 性为98．0％，氨基酸同源性为95．9％。 2．用试验～的针对CDV的F基因保守区设计的引物F、R，分别以阳性长春株和水 貂分离株的RNA为模板，建立了Real．time PCR方法来检测CDV，确定特异性产物 的Tm值。试验表明：阳性株和水貂分离株有相同的Tm值