土壤中分解尿素的细菌的分离与计数用精要.pptVIP

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 一、课题背景 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素 被农作物吸收。尿素只有被 分解成 之后才能被植物利用。 2、细菌能利用尿素的原因 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 CO(NH2)2 脲酶 + H2O + CO2 2NH3 氨 土壤中的细菌 不能直接 3、常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。 4、课题目的 从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 一.研究思路 筛选菌株 统计菌落数目 设置对照 ② ① ㈠. ㈡. ㈢. 1、实例： PCR技术 寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 ( )是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用 （930C）的DNA聚合酶。 ㈠.筛选菌株 DNA多聚酶链式反应 思考：怎样找到耐高温的酶呢？ 启示： 耐高温 要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等； 方法： 抑制大多数微生物的生长 促进目的菌株的生长 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。 2、实验室中微生物的筛选原理： 人为提供有利于 生长的条件(包括 )，同时抑制或阻止其他微生物生长。 目的菌株 ⑴ ⑵ 营养、温度、pH等 15.0g 琼脂 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4`7H2O 2.1g NaH2PO4 1.4g KH2PO4 3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基： ①从物理性质看此培养基属于哪类？ 固体培养基 ②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源：葡萄糖 氮源：尿素 培养基的氮源 ，只有能合成 的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于 分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 5、培养基选择分解尿素的微生物的原理 为尿素 脲酶 不能 允许 的微生物生长，同时 其他种类微生物生长的培养基，叫做选择培养基 尿素 尿素 特定种类 抑制或阻止 6、怎样证明此培养基具有选择性呢？ 以尿素为 唯一氮源 的培养基 牛肉膏 蛋白胨 培养基 ?是 分离 尿素 细菌 判断该 培养基 有无选 择性 实验组 对照组 培养基类型 是否 接种 ?目的 ?结果 只生长尿素细菌 生长多种微生物 是 1、显微镜直接计数： 利用血球计数板(血细胞计数板），在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 ㈡.统计菌落数目： 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 缺点： 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。 稀释涂布平板法 一个单细胞 一个菌落 2.间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的 是由 繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。 ⑵常用方法： 。 （3）思考：如何根据平板上的菌落数推测出每克样 品中的菌落数？ 计算公式： 每克样品中的菌株数 =（C÷V）×M 某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得 平板上菌落数的平均数为234，那么每克样 品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液 的体积为0.1ml） ( ) A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4 B 思考：比较两位同学的操作方法，哪位同学的结果接近真实值，你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要。如何改进？ 说明设置重复组的重要性。在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。 注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落