基因敲除动物模型与比较医学精要.pptVIP

基因敲除概述 基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成功的有基因插入突变和RNAi，它们同样可以达到基因敲除的目的。 基因敲除定义 中文名称：基因敲除 英文名称：gene knock-out; gene knockout 定义：将细胞基因组中某基因去除或使基因失去活性的技术。去除原核生物细胞、真核生物的生殖细胞、体细胞或干细胞基因组中的基因等。广义的基因敲除包括某个或某些基因的完全敲除、部分敲除、基因调控序列的敲除以及成段基因组序列的敲除。常用同源重组的方法。敲除基因用以观察生物或细胞的表型变化，是研究基因功能的重要手段。 ａ．ES细胞的获得　 ｂ．基因载体构建 ｃ．将基因打靶载体通过一定的方式(常用电穿孔法)导入同源 的胚胎干细胞(ES cell)中，使外源DNA与胚胎干细胞基因组中相应部分发生同源重组，将打靶载体中的DNA序列整合到内源目标基因组中从而得以使目标基因缺失。 ｄ．用选择性培养基筛选已击中的细胞 　　 ｅ．通过观察嵌和体小鼠的生物学形状的变化进而了解目的基因变化前后对小鼠的生物学形状的改变，达到研