人教版生物选修一课题1《DNA的粗提取与鉴定》ppt课件3.pptVIP

* 课题1 DNA的粗提取与鉴定 一.基础知识 （一）提取DNA的方法 1.提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法，分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。 2.提取DNA的基本思路 ①提取DNA，去除其他成分 ②利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异 （1）DNA的溶解性 DNA和蛋白质等成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀；或者让其他成分溶解，DNA析出。 3.DNA等大分子的理化性质 （2）DNA不溶于酒精溶液 DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。将DNA与蛋白质进一步分离。 （3）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ① 蛋白酶：水解蛋白质，对DNA没有影响。 ② 高温：大多数蛋白质不能忍受60～80℃，而DNA在80℃以上才会变性。 ③ 洗涤剂：溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质，但对DNA没有影响。 （二）DNA的鉴定 1.二苯胺法：沸水浴条件下，DNA遇二苯胺被染成蓝色。 2.紫外灯照射法：DNA的紫外吸收高峰在260nm处。 3.电泳法：此方法适合鉴定纯度较高的DNA。 二.实验设计 （一）实验材料的选取 从下列材料中选取2～3种 菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜； 鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞； 在液体培养基中培养的大肠杆菌 1. DNA的含量比较丰富，能够适合大量提取。 2. 所含化合物种类应比较单纯，避免由于其他物质化学性质与DNA相近，从而对实验现象产生某些干扰。 3. 实验材料的价格适宜，从而能相对的降低实验成本。 4. 实验材料在实验过程中的可操作性较强，在相对简单的条件下能大量提取出DNA，便于操作。 实验材料特点的比较 动物胸腺 鱼类精巢 植物组织 鸡血细胞 可操作性较强，适宜做定量分析 离心机 组织捣碎机 柠檬酸钠 丰富 取材不易价格高 可操作性强，效果明显，但不易定量控制 组织捣碎机 无 丰富 取材容易价格较低 实验成功率较低，实验效果与研磨液关系密切 常规 SDS EDTA 三羟甲基氨基甲烷 较丰富 取材容易价格较低 可操作性强， 实验效果明显 离心机 柠檬酸钠 丰富 取材容易价格较低 实验 效果 实验仪器配置 特殊药品 配置 DNA 含量 实验 成本 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1.动物细胞 ——容易破碎 鸡血细胞溶液：加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液。 为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分大量进入血细胞，使血细胞胀裂； 加上搅拌作用，加速鸡血细胞细胞膜、核膜破裂，从而释放出DNA。 2.植物细胞 ——需要溶解细胞膜 ① 加入一定的洗涤剂和食盐 ② 充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液 讨论：滤液/研磨液中可能含有哪些成分？ 可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质 洗涤剂：离子去污剂，能溶解细胞膜，利于DNA释放。 食盐：NaCl，有利于DNA溶解。 研磨不充分，核内的DNA释放不完全，提取的DNA量少，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。 1. DNA的溶解性 P55[方案一] 2. DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 P56[方案二、方案三] （三）除去滤液中的杂质 为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？ 方案二利用蛋白酶分解杂质蛋白，使提取的DNA与蛋白质分开； 方案三利用DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，使蛋白质变性与DNA分离。 用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。 方案二与方案三的原理有什么不同？ （四） DNA的析出与鉴定 加入与滤液体积相等的冷却的酒精溶液(体积分数95％)，静置2－3min，溶液中会出现白色丝状物。 1.DNA的析出 用玻璃棒沿一个方向搅拌，（以利于DNA分子的附着和缠绕）卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水。