c57小鼠氧诱模型视网膜的血管形态学观察、基因表达谱分析和edn2功能初探.pdfVIP

摘 要 目的 本研究的目的在于全面深化了解氧诱导C57小鼠造模过程中视网膜血 管的形态学变化，为准确、充分利用这一模型进行视网膜新生血管疾病研究提供直 观、详实的动物模型资料；系统分析C57小鼠视网膜血管发育、分化、增殖以及氧 浓度变化情况下视网膜基因表达的变化，筛选视网膜新生血管性疾病发生、发展的 关键因素，并应用基因干扰技术初步探讨筛选基因Edn2的作用。 方法 针对C57野生型小鼠及氧诱导小鼠，应用FD一2000S进行血管内灌注， 取小鼠视网膜按时间点连续铺片，观察C57小鼠视网膜血管发育、分化情况及氧诱 导过程中视网膜血管的变化，并进行评分；根据视网膜铺片结果，选择不同时间点， 分别为高氧初期、高氧晚期、相对低氧(即常氧)早期、血管增生与发育期、血管 发育与成熟期5个实验组，提取高氧诱导及野生型小鼠视网膜RNA，利用小鼠全基 因组表达谱芯片进行核苷酸杂交，应用SAM软件筛选差异表达基因，David数据库 进行基因注释，对部分筛选结果应用Real-timePCR进行验证。构建筛选的差异基 Blot、Real—time 因Edn2的干扰RNA，建立高糖体外模型，通过划痕试验、Western PCR、E1is