反义upar质对鼠ra实验性治疗的初步研究.pdf

摘 要 目的： 1. 根据AA 大鼠的关节局部肿胀、多发性关节炎及病理形态学等改变，明确反义uPAR 重组质粒 对大鼠AA 的治疗作用； 2. 根据AA 大鼠关节滑膜细胞uPAR 及VEGF 蛋白表达情况，分析反义uPAR 重组质粒通过阻断 AA 大鼠关节滑膜组织uPAR 及抑制滑膜组织VEGF 蛋白表达发挥治疗效应。 方法： 1．质粒的抽提：应用碱裂解法从细菌保存液(本课题组保留)抽提 pcDNA3.1(-)质粒及反义 uPAR/ pcDNA3.1(-)重组质粒。 2 ．实验大鼠AA模型的复制、分组及干预：50只雄性SD大鼠适应性饲养一周，按完全随机法将其 中8只为正常对照组，不做任何处理，其余42 只大鼠左足跖皮内注射完全弗氏佐剂(CFA)诱发大鼠AA 模型，模型复制成功后完全随机分为4组，每组8只，为模型对照组、生理盐水治疗组、空质粒治疗 组、重组质粒治疗组，后三组踝关节分别注射生理盐水、pcDNA3.1(-)质粒及反义uPAR/pcDNA3.1(-) 质粒。 3 ．结果观察：观察大鼠的一般情况、关节炎指数(AI)，光学显微镜下观察关节滑膜组织病理学变 化，免疫组织化学法检测关节滑膜组织uPAR 、VEGF蛋白表达情况。 结果： 1．质粒提取：大量提取质粒后，琼脂糖凝胶电泳及全自动紫外分光光度计作浓度、纯度测定，质 粒与目的片段大小相符，浓度与纯度正常，质粒抽提成功。 2 ．大体观察：随着大鼠AA 模型免疫时间的延长，模型对照组、生理盐水治疗组、空质粒治疗组 AI 评分增加较快，重组质粒治疗组AI 评分增加缓慢，后期逐渐下降，重组质粒治疗组与模型对照 组之间AI 评分比较有显著性差异（p0.01 ）； 3 ．HE 染色：与正常对照组比较，模型组大鼠滑膜明显增厚，滑膜表层细胞增生明显，滑膜组织 有淋巴细胞、单核细胞及少数散在分布的多核巨细胞浸润，新生血管增多，可见血管翳形成，重组 质粒治疗组滑膜组织增生较模型组明显减轻、淋巴细胞浸润减少，新生血管减少，血管翳明显减轻。 4 ．免疫组织化学染色：正常对照组大鼠滑膜组织uPAR 、VEGF 蛋白无或少量表达，与模型对照 组比较有显著性差异（p0.01 ）；模型对照组、生理盐水治疗组及空质粒治疗组之间 uPAR 、VEGF 蛋白表达无差异（p0.05 ）；重组质粒治疗组与模型对照组、生理盐水治疗组、空质粒治疗组之间 uPAR 、VEGF 蛋白表达有显著性差异（p0.01 ）。 结论： 1．反义uPAR 表达质粒对AA 大鼠关节局部肿胀、多发性关节炎及病理形态学等改变有明显的治 疗作用。 2 ．反义uPAR 重组质粒通过阻断滑膜组织uPAR 蛋白表达而抑制滑膜组织VEGF 蛋白表达，抑制 滑膜血管新生，为类风湿关节炎的基因治疗提供理论依据。 关键词： 质粒；类风湿性关节炎；佐剂性关节炎；关节炎指数；uPAR ；VEGF ； 论文类型： B （应用研究） I Abstract Object: 1. According to the changes that secondary paw swelling, polyarthritis, and pathomorphology change in RA, this study tends to clarify the therapeutic effect of antisense uPAR expressing plasmid in AA rats. 2. According to the investigation the expression of the uPAR and VEGF in synoviocytes, analysis the therapeutic effect of the antisense uPAR expressing plasmid through affect the uPAR and VEGF in synoviocytes. Methods: 1. Extraction plasmid: Using the traditional alkaline method to isolat