人胰岛的素基因在家蝇幼虫中的表达.pdfVIP

维普资讯 第 40卷 第 4 河 南 农 业 大 学 学 报 Vo1．40 No．4 2006红 8月 JournalofHenanAgriculturalUniversity Aug． 2006 文章编号：1000—2340(2006)04—0386—05 人胰岛素基因在家蝇幼虫中的表达 夏平安 ，刘维全 ，崔保安 ，张红英 (1．河南农业大学牧医工程学院，河南 郑州450002；2．中国农业大学生物学院，北京 100094) 摘要 ：构建 了家蝇基 因组文库 ，通过噬菌斑原位杂交技术从 家蝇基 因组文库 中筛选 出mdYPl克隆，并从 mdYPl 克隆中分离到含约 1．7kh5’．上游区的家蝇卵黄蛋 白．1基 因组基 因序列 ．PCR扩增 出大小不 同的4个启动子片 段 ，分别插入到切 除了CMV启动子 的pCMV．GFP质粒 中的绿色荧光蛋 白报 告基 因上游 ，构建 pMYP1．GFP，pMYP2． GFP，pMYP3．GFP和pMYP4．GFP4个重组质粒 ，经 电转移试验和荧光检测表明，P2(+684／+7)，P3(+1165／+7)和 P4(+1616／+7)3个启动子片段具有转录活性 ．将 P2，P3分别插入到切除了CMV启动子 的pCMV．ImINS重组质 粒 中的人胰 岛素基 因上游 ，构建 pMYP2．ImINS和 pMYP3．ImINS重组质粒 ，电转移新鲜家蝇卵，放射免疫分析法检 测人胰 岛素在蝇蛆 中的表达水平．pMYP2．ImINS和 pMYP3．ImINS组 的人胰 岛素表达量分别为 29．6，22．1 mU·L_。；阳性对照组为 13．2mU·L_。；阴性对照组为8．8mU·L_。．结果说明P2启动子片段活性最强，同时又证 明 了内源性启动子能提高外源基 因的表达效率 ． 关键词 ：家蝇；卵黄蛋白基因；启动子；克隆；人胰岛素 中图分类号 ：S969．453．1；Q785 文献标识码 ：A Expression ofHumanInsulinGeneRegulatedbymdYP1 Promoterin M uscaDomesticaLarva XIA Ping．an ，LIU W ei．quan ，CUIBao．an ，ZHANG Hong．ying (1．EngineeringCollegeofAnimalHusbandryandVeterinary Science， HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou450002，China；2．CollegeofBiology， ChinaAgriculturalUniversity，Beijing100094，China) Abstract：A partialmuscadomesticagenomiclibrary wasconstructed．W iththeprobelabeledwithDigoxi· genofa768bppartialeDNAfragmentofmuscadomesticayo]kprotein·1(mdYP1)geneobtainedbyPCR， thegenomiclibrary wasscreenedbyhybridization．A mdYP1plaquewaschosedandpurifiedbysitu hy— bridization．A mdYP1genomicgenecontainingabout1．7kb：5’一upstream regionwasisolatedfrom purified positivepl