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柄区肽和肾素(前体)受体干扰对肾素前体 激活的P13K＼AKT信号通路的影响 硕士生姓名： 米芋枚 指导教师： 姜一农 教授 指导小组： 路岩 副教授 专业名称： 内科学 摘 要 背景： 动脉粥样硬化(AS)是严重影响人类的健康的主要疾病。其机理的研 究已进行了数十年。目前一致认为，炎症反应和内皮功能紊乱对AS的形 成和发展起着关键作用。许多危险因素可激活一些信号通道蛋白和炎症 因子，导致内皮功能异常。其中肾素血管紧张素系统(RAS)的效应因子血 II)在动脉粥样硬化中起着重要作用。过去认为，肾素发 管紧张素II(Ang I)，除此之外无其他生物学效 挥酶活性使血管紧张素原转变成I(Ang 应。肾素前体则被视为无活性的肾素的前体。近年来，随着肾素(前体) 受体[(pro)renin 识。一些研究表明，肾素和肾素前体通过与(P)RR结合，可发挥不依赖于 II的生物学作用，使肾系膜细胞增殖，平滑肌细胞迁移等作用。本实 Ang 验组前期实验用免疫组化的方法首次发现(P)RR在人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)中也有表达。于是，我们推测肾素(前体)及其受体在血管内皮 细胞中可能存在与肾系膜细胞及心肌细胞类似的病理生理作用。 肾素前体前肽，即柄区肽(handleregionpeptide，HRP)，是一段人工 合成的含有10个氨基酸的肽片段，影响肾素前体与(P)RR的结合，因此 果存在矛盾。本实验将通过成倍增加HRP作用浓度，观察HRP能否阻断 (P)RR，对内皮细胞起到保护性作用。 P13K＼AKT信号通路能直接磷酸化多种细胞因子，如NFlcB、Bcl．2、 TGF．13等，与血管壁细胞表型转换、增殖、迁移和肥大有关。因此， P13K＼AKT信号通路可能参与肾素前体及其受体的作用机制。 目的： 观察在离体培养的HUVEC II并通过 q，，肾素前体能否不依赖于Ang 观察HRP是否存在(P)RR阻断功能。 方法： 1．体外培养原代HUVECs。 x1 素II受体ATl、AT2，观察肾素前体(2 0母M)对细胞中P13K，p．AKT， NFK：B．P65蛋白以及细胞上清液中炎症因子IL．6的影响。 3．分别以(P)RR—siRNA干扰细胞(P)RR，以及三种浓度的 x x l0一M，51 0x1 HRP(1 0一M，1 0巧M)作用于细胞，观察各自对肾素前体引 起的AKT、NFl：B．P65蛋白以及IL．6激活的影响。 观察 5．(P)RR干扰效率通过RT-PCR检测。 6．P13K，p—AKT，p65蛋白通过western．blot检测。 7．细胞上清液中IL．6的浓度用ELISA试剂盒检测。 结果： 1．肾素前体可以上调P13K，P．AKT，P65蛋白和炎症因子IL一6的表达。 2．三种HRP浓度均不能抑制肾素前体引起的AKT，P65蛋白和炎症因 子IL一6激活。 3．(P)RR干扰可以抑制肾素前体引起的AKT，P65蛋白和炎症因子 IL一6激活。 4．肾素前体引起的P65和IL．6表达增加不能被wortmannin所抑制。 结论： 1．肾素前体可以不依赖于AngII激活P13K＼AKT信号通路及细胞因 子。 2．肾素前体通过(P)RR引起AKT磷酸化，并激活核转录因子P65，炎 症因子IL一6。 3．不同浓度的HRP均无(P)RR阻断作用。 路。 肾素前体HR