慢病毒介导的自基因对树突状细胞的杀伤作用.pdfVIP

温少I,I医学院硕士学位论文 慢病毒介导的自杀基因对树突状细胞的杀伤作用 中文摘要 目的：探讨慢病毒介导的胸腺激酶对小鼠树突状细胞的杀伤作用。构建含自杀基 因TK的慢病毒载体质粒，转染树突状细胞后获得稳定高效的转染效率，通过更 昔洛韦激活自杀基因使细胞死亡。 方法： 1、通过慢病毒的包装细胞T293，把含有自杀基因TK的目的基因片段导入慢病毒， 培养收集病毒并测定慢病毒的滴度。 2、通过对树突状细胞的培养，使具有逆转录功能的慢病毒进入树突状细胞，并 通过观察荧光显微镜下荧光的数量来判断转染效率，用流式细胞仪检测GFP率。 然后在细胞的内激酶作用下最终磷酸化为三磷酸GCV(GCV—TP)的毒性物质，逆 转入DNA合成链中，导致DNA合成链中止、染色体变性和姐妹染色单体交换，最终 导致细胞死亡。 结果： 1、通过慢病毒包装，收集到含有自杀基因的慢病毒，并测其滴度为2E+9TU／ml， 达到实验要求。 2、慢病毒转染树突状细胞后，观察树突状细胞的形态、大小及数量与对照组细 胞无明显差异，经流式细胞仪检测GFP率为96．43％。 3、CCK一8法检测发现，树突状细胞随着更昔洛韦药物浓度的增加，细胞死亡率 逐