第六章目的基因的分离2014摘要.pptVIP

基因工程的基本步骤 第六章 目的基因的分离 基因工程的上游工程是目的基因的制取和无性繁殖。 具体地说是从生物体的组织、 器官或细胞制取目的基因，或人工合成目的基因，使目的基因与载体连接，导入受体细胞，筛选和进行无性繁殖。这个过程称为基因克隆（gene cloning）。 克隆的概念: 个体水平上: 表示由具有相同基因型的同一物种的两个体或数个个体组成的群体,如双胞胎. 细胞水平上:由同一个祖细胞分裂而来的一群遗传上同一的子细胞群体. 分子水平上:凡带有一段DNA插入序列的,独特的寄主/载体单元亦叫克隆.比如重组质粒载体 克隆基因的方法 PCR或人工合成法 从基因组文库或cDNA文库中分离基因 差减杂交法、扣除杂交、差异显示法  基因文库：指某个生物的基因组 DNA 或 cDNA 片段与适当的载体在体外通过重组后，转化宿主细胞，并通过一定的选择机制筛选后得到大量的阳性菌落（或噬菌体），所有菌落或噬菌体的集合 按照外源 DNA 片段的来源，可将基因文库分为：基因组 DNA 文库（genomic DNA library）和 cDNA 文库（complementary DNA library）。 一、cDNA文库的构建与筛选 (一) 概念： 将生物特定的组织器官或特定