第六章目的重组子的筛选与鉴定摘要.pptVIP

阳性重组子的筛选和鉴定（检） 不同检测方法可以归类于以下三个层次： 载体遗传标记检测 克隆DNA序列检测 外源基因表达产物检测 一、根据遗传表型筛选 1．抗生素平板筛选 大多数克隆载体均带有抗生素抗性基因，常见的有抗氨苄青霉素基因(Ampr)、抗四环素基因(Tetr)、抗卡那霉素基因(Kanr)等。如果外源DNA片段插入载体的位点在抗药性基因之外，不导致抗药性基因的插入失活，仍能编码抗药性基因，这种含有重组子的转化细胞能够在含有相应药物的琼脂平板上生长成菌落。 但是除阳性重组子以外．自身环化的载体、未酶解完全的载体以及非目的基因插入载体形成的重组子均能转化细胞而能生长，故本法仅是阳性重组子的初步筛选。 同样还可应用插入失活双抗生素对照筛选法，在含有两个抗药性基因的载体中，通过插入失活其中一个基因，可用两个分别含有同药物的平板对照筛选阳性重组子。如pBR322质粒含有Tetr、Ampr双抗药性，插入失活Tetr后，Tet r 、Ampr为含载体的阴性菌落，Tet - 、Ampr表型的菌落为阳性，Tet - 、Amp - 的表型不能生长，对未转化的受体细胞，该方法筛选出阳性重组子的几率较高(Tetr：四环素抗性；Ampr：氨苄毒霉素抗性，Tet - ：对四环素敏感；Amp - ：对氨苄青霉素敏感) 2．?互补筛选 利用?-半乳糖苷酶基因构建的载体如pU