浙江大学生物化学实验甲 PCR基因扩增及性别鉴定.pptVIP

PCR基因扩增与性别鉴定原理 1、PCR技术的原理 PCR技术是多聚酶链式反应技术的简称，由K.B.Mullis于1983年发明，为一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的技术。 PCR技术操作简单，可在短时间内获得数百万个特异序列的拷贝，因此PCR技术虽然问世时间仅数年，但它已迅速渗透到分子生物学的各个领域。在分子克隆、遗传病的基因诊断、法医学、考古学等方面均得到了广泛的应用。 PCR基因扩增与性别鉴定原理 PCR技术与细胞内发生的DNA复制过程十分类似，为在模板DNA、引物（16bp以上，最好为20~24bp和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。按照反应的特点可将其分为三步： ⑴、变性 通过加热使DNA双螺旋的氢键断裂，双链解开形成单链。 ⑵、退火 使碱基互补的链形成双螺旋结构。 PCR基因扩增与性别鉴定原理 由于模板分子结构较引物要复杂的多，而且反应体系中引物DNA量大大多于模板，使引物和其互补的模板在局部形成杂交链，而模板DNA双链之间互补的机会较少； ⑶、延伸 在DNA聚合酶和4种脱氧核苷三磷酸底物及Mg2+存在的条件下，由DNA聚合酶5’→ 3’的聚合酶活性催化以引物为起点的DNA链延伸反应。 以上3步为一个循环，每一循环的产物均可作为下一个循环的模板，数小时之后，介于两个引物之间的特异性DNA片段将得到大量的复制，数量可达到2×106~7拷