氯胺酮对体外培发育期海马神经元神经毒性作用的研究.pdfVIP

中文摘要 氯胺酮对体外培养发育期海马神经元 神经毒性作用的研究 摘 要 一、原代大鼠海马神经元培养、鉴定及形态学观察 目的：通过对新生24h内SD大鼠海马神经元培养，掌握大鼠海马神 经元体外培养方法；利用免疫荧光细胞化学鉴定神经元纯度；观察原代海 马神经元形态学特点，测定细胞生长曲线。 方法：取新生24h内SD乳鼠，断头取脑，于预冷D—hanks玻璃皿中， 剥离两侧海马，剥除血管、被膜，用眼科虹膜剪将海马组织剪成小块，将 其移入离心管，以800r／min5min离心弃上清，加入3倍于海马组织体积 至塑料培养瓶中，放入培养箱经差速贴壁1h，收获贴壁速度较胶质细胞 慢的神经元，吹打后以O．4％台盼蓝染色计数活细胞并调整悬液的细胞密 神经元生长情况。取培养7 1 serum 0％牛血清白蛋白(bovine 200)4*C过夜，加入2％BSA稀释的l：50FITC标记的羊抗小鼠IgG二抗、 Hoechst 50“g／mL 33258复染细胞核，湿盒内室温避光孵育1h，倒置荧光 下随机选取5个视野，计算阳性神经元的纯度。