水产动物生理学实验精要.ppt

水产动物生理学实验 实验一? 生理学实验及常用仪器介绍???????  兴奋与兴奋性的观察及分析 【目的要求】 1．通过生理学实验及常用仪器介绍、了解生理学实验的基本任务、内容和方法，理解生理学既是一门理论科学、又是一门实验科学的重要意义。 2．学习蛙类动物双毁髓的实验方法,掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。 3．通过对组织兴奋和兴奋性的实验观察，加深对兴奋与兴奋性概念的理解。要求学会观察神经—肌肉标本的兴奋与兴奋性，会分析兴奋与兴奋性的区别及相关联系。 【方法与步骤】一、生理学实验基本原理及仪器介绍 常用的生物机能实验系统 张力换能器 神经屏蔽盒 血球计数板 二、坐骨神经腓肠肌标本的制备 三、组织兴奋和兴奋性的实验观察 依次分别用食盐(化学刺激)、热玻棒(热剌激），锌铜弓（电化学刺激），以及小镊子夹捏(机械刺激)坐骨神经的中枢端．观察其反应。再依次重复用刺激直接刺激腓肠肌，观察其反应 实验二、骨骼肌的单收缩、复合收缩与强 直收缩 【目的要求】 1．了解骨骼肌收缩的总和现象。 2．观察不同频率的阈上刺激引起肌肉收缩形式的改变。 【基本原理】 两个同等强度的阈上刺激，相继作用于神经-肌肉标本，如果刺激间隔大于单收缩的时程，肌肉则出现两个分离的单收缩； 如果刺激间隔小于单收缩的时程，则出现两个收缩反应的重叠，称为收缩的总和。 当同等强度的连续阈上刺激作用于标本时，出现多个收缩反应的融合，称为强直收缩。后一收缩发生在前一收缩的舒张期时，称为不完全强直收。后一收缩发生在前一收缩的收缩期时，各自的收缩完全融合，肌肉处于持续的收缩状态，称为完全强直收缩。 【方法与步骤】 1．按实验1 的方法制备坐骨神经-腓肠肌标本并将其固定在肌槽上。以单脉冲刺激神经，记录肌肉收缩曲线（图2-12）。 2．刺激强度不变，以1s 的间隔输出两个单脉冲刺激标本，肌肉则出现 两个分离的单收缩，记录收缩曲线。 3．用同等刺激强度，改变刺激间隔，刺激标本，记录肌肉收缩曲线。 实验三、神经干动作电位观察及神经纤维兴奋传导速度的测定 【目的要求】 1．学习电生理仪的使用方法。 2．观察蟾蜍坐骨神经动作电位的基本波形，并了解其产生的基本原理。 【基本原理】 神经或肌肉发生兴奋时，兴奋部位发生电位变化，这种可扩布性的电位变化即为动作电位。神经的动作电位是神经兴奋的客观指标。 如将两个引导电极分别置于正常完整的神经干表面，动作电位先后通过两个引导电极，可引导出两个方向相反的电位偏转，称为双相动作电位。 如将两引导电极之间的神经麻醉或损伤，动作电位只通过第一个电极引导出来，它只有一个方向的电位偏转，称为单相动作电位。 【方法与步骤】 1．制备蟾蜍坐骨神经干标本，神经干尽可能分离得长些。在制备过程中，要把神经周围的结缔组织分离干净，但勿损伤神经标本。 2．连接实验装置： 连接电子刺激器、刺激隔离器、神经屏蔽盒和示波器。注意：各仪器应妥善接地，各仪器的连接应接触良好。 3．调节刺激器“强度” ，使其从0 逐渐增加。仔细观察其波形。 4．根据扫描速度，测量从刺激伪迹至两个动作电位起始点之间的时间差（t）。 5．测量神经屏蔽盒内两对电极之间的距离（s），按公式v=s/t(m/s）计算神经冲动传导的速度。 实验四、几种动物血细胞计数和血红蛋白的测定 【目的要求】 1、学习红细胞、白细胞计数的方法。 2、掌握比色法测定血红蛋白含量的方法。 3、认识物种间血液学差异。 【基本原理】 血液中血细胞数的计算是使用血细胞计数板。而且要用适当的溶液将血液稀释后，放入计数板的计数室内，在显微镜下计算一定容积血液稀释液中的血细胞个数，再将所得结果换算为1ul 血液中的血细胞个数。 测定血红蛋白含量的方法很多，实验常用比色法。其原理是在一定量的血液中，血红蛋白经少量盐酸的作用，使亚铁血红素变成高铁血红素，呈现较稳定的棕色。 【方法与步骤】 测定血红蛋白含量 1．用滴管加0.1mol/LHCl 于血红蛋白稀释管内，到刻度10 处。 2．用血红蛋白吸管的尖端接触血滴，吸血至刻度20mm3 处（0.02ml）。 3．摇匀或用小玻璃棒搅匀后，放置10min，使盐酸与血红蛋白充分作用。 4．用滴管向稀释管内逐滴加入蒸馏水，直至颜色与标准玻璃色柱相同为止。稀释管上液面的刻度读数即为每100ml 血液血红蛋白的克数。 红细胞、白细胞计数 1．采血及稀释用吸管分别吸取0.38ml 白细胞稀释液和3.98ml 红细胞稀释液放入试管内备用。 2、用血红蛋白吸血管吸血至刻度20ul 处，将血液吹入分别盛有血细胞稀释液的试管内 3．计数血液稀释液滴入计数室后，须静置2-3min，然后在低倍显微镜下计数。计数白细胞时，数四角4 个大方格的白细胞总数；计数红细胞时，数中央大方格