一氧化氮作用前角质形成细胞差异蛋白的筛选与分析.pdfVIP

一氧化氮作用前后角质形成细胞差异 蛋白的筛选与分析 硕士生姓名：张宇恒 专旨导教师：支lj晓明教授 专业名称：皮肤病与性病学 摘要 目的：研究一氧化氮(NO)对体外培养的永生化角质形成细胞(HaCaT细胞) 及人原代培养的角质形成细胞(KC)蛋白质表达的影响，在蛋白水平上寻找NO作 用的靶位。进一步探讨NO在银屑病发病中的地位和作用。 方法：体外培养HaCaT细胞及人原代KC，通过CCK一8法检测不同浓度外源 性NO供体S一亚硝基谷胱甘肽(GSNO)作用后，在不同时间点的细胞增殖率， 绘制浓度与细胞增值率曲线，筛选最佳GSNO浓度。向处于指数增长期的HaCaT 细胞及人原代KC中加入最佳浓度的GSNO进行刺激。对照组不予处理。加药处 理的细胞和对照组用细胞裂解液分别进行充分裂解，提取细胞全蛋白。应用2一D 纯化试剂盒进行蛋白纯化，蛋白定量。纯化后的蛋白中加入上样缓冲液制成样本， 首先进行第一向等电聚焦电泳，胶条的平衡，再进行第二向聚丙烯酰胺凝胶电泳。 电泳完成的凝胶进行硝酸银染色，图像扫描