家族性肌萎缩侧硬化模型中泛素与sod1蛋白的相关性研究.pdf

Y1 目 录 中文摘要…………………………………………………………………1 英文摘要…………………………………………………………………3 研究论文家族性肌萎缩侧索硬化模型中泛素与SODl蛋白的相关 性研究 前言…………………………………………………………………6日IJ舌…………………………………………………………．．……．6 材料与方法…………………………………………………………6 结果…………………………………………………………………15 附图…………………………………………………………………16 讨论……………………．．…………………………………………．19 结论…………………………………………………………………22 参考文献……………………………………………………………23 综述泛素阳性包涵体与神经系统变性疾病…………………………26 致谢………………………………………………………………………36 个人简历…………………………………………………………………37 中文摘要 家族性肌萎缩侧索硬化模型中泛素与SODl 蛋白的相关性研究 摘 要 Lateral 目的：肌萎缩侧索硬化(Anlyotrophic 为常见的成人发病的神经系统变性疾病之一，人群发病率不到十万分之 五。ALS以选择性损害脊髓前角、脑干和大脑皮层运动神经元为特征， 临床表现为进行性出现四肢肌肉的无力、萎缩、肌束震颤，并有肌张力增 高、腱反射亢进、病理征阳性以及构音障碍，最终因呼吸衰竭而死亡，病 人存活期为3．5年。根据其发病和遗传特点可分为家族性肌萎缩侧索硬化 (Familial Lateral Amyotropllic Lateral 化(SporaImc加nyotrophic 突变引起，其突变位点在21号染色体长臂CⅣZnSOD基因内，即 21q22．1．22．2。研究认为在家族性肌萎缩侧索硬化患者和转基因鼠中，突 变SODl发生了错误折叠，使其不能被泛素．蛋白酶体系统降解，导致在 胞浆内聚集，形成SODl阳性包涵体，而异常聚集的SODl又具有了获得 性毒性，从而影响运动神经元的功能，导致疾病的发生；神经元内的泛素 阳性包涵体被公认为是肌萎缩侧索硬化的病理学标志，运动神经元中泛素 化聚集物的形成与积累参与了突变SODl毒性功能的获得。泛素．蛋白酶 体系统(1lbiquitin-proteasome 要作用，而底物蛋白泛素化则是UPS的启动信号。本研究旨在应用经典 家族性肌萎缩侧索硬化模型SODlG93A转基因小鼠，在底物蛋白泛素化这 一水平定性研究泛素与SODl蛋白发病过程中相互作用方式，从而揭示突 变SODl蛋白的泛素化过程能否正常进行。 方法：实验动物采用经典家族性肌萎缩侧索硬化模型SODlG93A转基 因小鼠，并对其基因进行鉴定，阳性者即为SODlG93A转基因鼠，阴性者作 为同窝对照。实验分为三组：症状前期组、症状期组和终末期组，每组均 设相应的同窝对照；各个时期每组取6只小鼠。实验技术采用蛋白质免疫 中文摘要 印迹、激光共聚焦显微镜和免疫共沉淀的方法，分别观察小鼠腰膨大组织 症状前期、症状期、终末期及其同窝对照腰膨大组织中的分布、共定位以 及相互结合情况。 结果： 1蛋白质免疫印迹(Wrest锄blot)检测显示： 条带为小鼠自身携带的SODl(21I①)，另一分子量较大的条带为转入突 条带。 2激光共聚焦显微镜发现： 对照组：可见正常形态及数量的脊髓前角运动神经元，泛素与SODl 蛋白在胞浆内广泛、均匀分布，并且二者存在广泛的共定位；症状前期： 脊髓前角的运动神经元数量多，泛素与SODl蛋白在胞浆内的含量丰富、 分布均匀，并且二者亦广泛的共定位；症状期：运动神经元数量较症状前 期有所减少，泛素与SODl在胞浆内广泛共定位的背景上还可见点状聚集 物，二者在聚集物中亦存在共定位的