小鼠皮肤切创愈过程中磷酸化jnk表达及其与损伤时间相关性的研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 小鼠皮肤切创愈合过程中磷酸化JNK表达及其与损伤 时间相关性的研究 目 的 皮肤损伤愈合是一个复杂的过程，包括血液成分凝集、炎症、肉芽组织形成、 新生上皮覆盖、结缔组织收缩和纤维化等过程。c-Jun氨基末端激酶(e-Jun N．terminalkinase／stress．activated kinase，JNK／SAPK)为丝裂酶原活化蛋白激 protein kinase，MAPK)家族的一个重要的亚族，可通过细胞 酶(mitogen-activatedprotein 性压力和炎症刺激发生磷酸化而激活，与重要的细胞反应有关，比如炎性反应和 凋亡。本研究应用免疫组织化学和Westernblot技术，检Nd,鼠皮肤损伤区切创后 伤愈合中的作用及其在损伤时间推断上应用的可能性。 实验材料与方法 健康成年(8周龄)清洁级昆明系小鼠55只，雌雄不限，体质量35～409， 随机分为11组。其中皮肤切创分为10个时间段组，另一组为正常对照组，每组 均为5只小鼠。乙醚气体吸入麻醉，背部剪毛处理后，常规手术消毒，在背部中 央做一纵行长1．Scm皮肤全层切口，深达筋膜。分别于伤后oh、3h、6h、12h、 织。正常对照组小鼠麻醉后背部剪毛，不做切创，观察至14d，脱颈椎处死，取 blot检测应 相同部位同等大小皮肤，以备HE染色、免疫组织化学染色和Western 用。应用免疫组织化学和Westernblot技术检测55例小鼠皮肤切创后各时间段 p-JNK变化情况，以非切创小鼠皮肤组织作对照，显微镜x400倍下，在损伤区及 损伤周边区随机选取lO个视野，计数细胞总数、阳性细胞数及阳性细胞率。应用 Fluochem V2．0软件检测各时间段的平均灰度值，测得数据用均数士标准差(孑±s) 表示。用SPSSl3．0for Windows进行单因素方差分析，以P0．05为差异有统计 学意义。 结 果 正常对照组小鼠皮肤的表皮、毛囊及皮脂腺中表达P．JNK。皮肤切创伤后6h， 可见少数多核粒细胞有p-JNK表达。伤后12-24h，大量浸润的多核粒细胞和部 以单个核细胞为主。伤后5-14d p-JNK表达主要在成纤维细胞中。伤后0--一3h， p-JNK阳性细胞率较低，随着伤后时间的延长，p-JNK阳性细胞率逐渐增加，1d 达到高峰。伤后3--5d一直呈高表达状态。伤后7d P．JNK阳性细胞率达到第二峰， 随后逐渐下降。除伤后3d与5d阳性细胞率无统计学差异外(尸0．05)，其他各 组与相邻上组的细胞总数及阳性细胞率差异均有统计学意义(尸0．05)。Western blot结果显示正常对照皮肤内有p-JNK阳性条带。皮肤切创伤后各时间段组p-JNK 达到高峰。伤后5d、10d，较少；但伤后7d p-YNK相对较深。到伤后14dp-JNK 阳性条带基本与正常对照组条带情况一致。除oh与正常对照组间平均灰度值差异 无统计学意义外(P0．05)，其余各组间平均灰度值差异均具有统计学意义(P 0．05)。 结 论 1、正常对照组小鼠皮肤的表皮、毛囊及皮脂腺中表达P．JNK。 2、小鼠皮肤切创愈合过程中多核粒细胞、单个核细胞及成纤维细胞表达 p-JNK。 3、小鼠皮肤切创愈合过程中p-JNK对诱导多核粒细胞、单个核细胞及成纤维 细胞的凋亡可能具有调节作用。 4、小鼠皮肤切创愈合过程中p-JNK表达的规律性变化可用于皮肤切创损伤时 间的推断。 关键词 法医病理；皮肤损伤；凋亡；磷酸化．INK；损伤时间