猪圆环病毒2型rf2基因表达及重组蛋白elisa方法的建立.pdfVIP

中文摘要 circovurus 猪圆环病毒2型(Porcine 2，PCV2)是引起猪断奶后多系统衰竭综合征等 type 相关疾病的重要病原。PCV2的ORF2基因不仅是其主要结构蛋白的编码基因，而且也是区分 BF株ORF2基因，并进行了分子克隆，成功实现了ORF2基因在大肠杆菌中的表达，对表达的 重组蛋白进行了初步纯化，利用纯化的重组蛋白初步建立了检测PCV2抗体的ELISA方法。采 用PCR技术对12个规模化猪场猪断奶后多系统衰竭综合征发病猪群进行了PCV2检测，完成 6株PCV2分离毒株的全基因组序列测定与分析。 因进行PCR扩增，产物经琼脂糖凝胶电泳分析，呈现一条约720 bp的特异条带，将其回收后 克隆到pGEMT．Easy载体。根据基因分析，设计一对带有酶切位点的引物，从克隆的pGEM T．ORF2重组质粒扩增出大小为593 bp的ORF2基因片段，然后克隆到表达载体pET-32a中， 经Xhol和Ba