脂联素对脓毒症鼠的肺保护作用及其机制研究.pdf

脂联素对脓毒症大鼠的肺保护作用及其机制研究 中文摘要 脂联素对脓毒症大鼠的肺保护作用及其机制研究 中文摘要 第一部分 脂联素对脓毒症大鼠肺损伤及炎症介质的影响 目的： 探讨脂联素（APN ）对脓毒症大鼠肺损伤及炎症介质的影响。 方法： 采用CLP法建立脓毒症模型。雄性 Wistar 大鼠 54 只，随机分为对照组（C 组）、 脓毒症模型组（CLP 组）、APN 预处理组（APN 组）。各组随机抽取 8 只大鼠行 5 天生存率分析。APN 组于 CLP 前 12h i.p. APN （6 mg/kg ）。CLP 后动脉血气分析、 测定血浆 TNF-α、IL-6 、HMGB1 水平及血清 ALT 、AST 、BUN 、Cr 、CK 浓度； 测定肺 W/D 比值，观察肺组织病理变化及肺损伤病理学评分；检测肺泡灌洗液 （BALF ）中总蛋白含量、白细胞总数和分类以及 TNF-α、IL-6 水平；检测肺组织 MPO 、SOD 及 HMGB1 mRNA 水平。 结果： 1、与 C 组比较，CLP 和 APN 组大鼠 5 天生存率和血气 PaO2 均下降 （P 0.05 ）；血浆 TNF-α、IL-6 和 HMGB1 水平及血清生化指标均升高（P 0.05 ）； 肺 W/D 比值、肺损伤病理学评分升高（P 0.05 ）；BALF 中蛋白含量、白细胞总数 和 PMN% 及 TNF-α、IL-6 水平均升高（P 0.05 ）；肺组织 SOD 活性下降（P 0.05 ）， MPO 活性和 HMGB1 mRNA 水平表达均升高（P 0.05 ）。 2 、与 CLP 组比较，APN 组大鼠5天生存率及血气 PaO2 升高（P 0.05 ）；血浆 TNF-α、IL-6 和 HMGB1 水平及血清生化指标降低（P 0.05 ）；肺 W/D 比值、肺损 伤病理学评分均下降（P 0.05 ）；BALF 中蛋白含量、白细胞总数和 PMN% 及 TNF-α、IL-6 水平均下降（P 0.05 ）；肺组织 SOD 活性升高（P 0.05 ），MPO 活 性及 HMGB1 mRNA 水平均有所下降（P 0.05 ）。 结论： I 中文摘要 脂联素对脓毒症大鼠的肺保护作用及其机制研究 APN 通过减少肺水含量，减轻肺病理损伤程度，抑制中性粒细胞聚集，提高脓 毒症大鼠生存率，抑制炎症因子的释放，对脓毒症大鼠肺损伤具有保护作用。 第二部分 脂联素通过 IL-6 及 JAK2/STAT3 信号转导通路 影响脓毒症大鼠肺损伤的研究 目的： 观察脂联素是否通过抑制 IL-6/JAK/STAT 通路中的作用位点发挥对脓毒症大 鼠肺组织的保护作用。 方法： 选用 120 只雄性 Wistar 大鼠，随机分为：对照组（C 组）、脓毒症模型组（CLP 组）、脂联素组（APN 组）、脂联素+抗 IL-6 单克隆抗体组（APN+ANTI-IL-6 组）、 脂联素+雷帕霉素组（APN+RPM 组）。APN 组、APN+ANTI-IL-6 组及 APN+ RPM 组于 CLP 前 12h i.p. APN （6 mg/kg ）。APN+ANTI-IL-6 组大鼠于 CLP 前 1h i.p. ANTI-IL-6 （0.5 mg/kg ）。APN+RPM 组于 CLP 前 1h i.p. RPM （0.4 mg/kg ）。各组 随机抽取 8 只大鼠行 5d 生存率分析。CLP 后各组随机抽取 10 只大鼠进行肺组织 病理学检查，测定各组肺 W/D 比；肺组织MPO 活性；使用 ELISA 测定血浆 TNF-α、 IL-6 和 HMGB1 水平；使用 EMSA 测定肺组织 STAT3 DNA 结合活性；Real-time PCR 测定肺组织 TLR4 mRNA 及 HMGB1 mRNA 表达水平。 结果： 1 、与 C 组比较，CLP 组、APN 组、APN+ANTI-IL-6 组、APN+RPM 组大鼠 5d 生存率降低（P 0.05 ），血浆TNF-α 、IL-6 和 HMGB1 水平显著升高（P 0.05 ）， 肺损伤病理学评分、肺组织 W/D 比、MPO 活性、STAT3 DNA 结合活性以及 TLR4 mRNA 、HMGB1 mRNA 水平在 CLP 后均增加（P 0.05 ）。 2 、与 CLP 组比较，APN 组和 APN+RPM 组 5d 生存率升高（P 0.05 ），APN 组、APN+ANTI-IL-6 组、AP