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10株芽孢杆菌 混合固态发酵 基本特性研究 姓 名：王传珺 指导教师：王 新 主要内容 第一章 引言 第二章 10株芽孢杆菌液态发酵 第三章 10株芽孢杆菌固态发酵 第四章 10株菌的生理生化特性 第五章 结论 第一章 引言 微生物发酵过程 ： 液态发酵(Submerged Fermentation,SmF) 发酵体系有大量游离水存在，底物浸没或是溶解于水相之中。 固态发酵(Solid-stateFermentation,SSF） 发酵体系没有游离水存在，微生物是在其有足够湿度的固态底物上进行反应，底物则既不溶于水，也不悬浮于水中。 固态发酵是最古老的生物技术之一。 因其具有工艺简单、能耗低、环境污染少、操作粗放等特点而重新受到重视。 饲用微生态制剂 定义：一种可通过改善肠道菌群平衡，而对宿主施加有利影响的活微生态制剂。 饲用益生芽孢杆菌具 有抗逆性强、耐高温 高压、易贮存等特性， 是微生态制剂主要组 成菌。 研究目的 考察10株饲用芽孢杆菌单独培养及混合固态发酵的基本特性，为进一步大规模制备饲用微生态制剂提供参考数据。 第2章 10株芽孢杆菌的液态发酵 2.1 10株菌的单独液态培养 2.2 10株菌的混合液态发酵 2.3 10株菌的抑制作用 2.1 10株菌单独液态培养 实验方法： 吸取10株菌的备用种液1mL， 分别接入含50mL液态培养基 的三角摇瓶中，37℃，150r/m ， 摇床培养12h。 每3h测定菌浊度OD600。 每3h 10倍梯度稀释涂平板 以确定活菌数。 10株菌的浊度（OD600） 10株菌的活菌数（CFU/ml） 2.2 10株菌的混合液态发酵 实验方法： 吸10株菌液0.5mL分别接入10mL牛肉膏蛋白胨液体试管, 37℃，150r/m 摇床培养。 菌浊度控制在1左右下摇床放入4℃冰箱冷藏，作为二级种液，备用。 吸取各菌株的二级种液200μL接入装50ml牛肉膏蛋白胨液体的摇瓶中，37℃，150r/m 培养18小时。 10倍梯度稀释，涂平板。37℃培养过夜。 10株菌混合培养结果 2.3 10株菌的抑制作用 实验方法： 将10株菌液分别接种到温热的液态培养基中，混合均匀后倒平板，打孔。 分别吸取10株菌液2mL， 5000r/m 离心15min， 吸取上清液150 ul接入 平板孔中，4℃下冷藏 数小时37℃培养过夜。 有些微生物在生长过程中所产生的代谢产物如细菌素、内毒素、抗生素等，对其他微生物的生长有抑制作用 。 如果实验菌株存在 抑制作用，那么在对应 孔位处被抑制菌株不会 生长，产生透明的抑菌 圈。 10株菌的互相抑制实验 第3章 10株芽孢杆菌的固态发酵 3.1 固态培养接菌方式的选择 3.2 最适培养基的选择 3.3 10株菌的单独固态发酵 3.4 M5与酵母，米曲霉的混合固态培养 3.1 固态培养接菌方式的选择 实验方法： 方式一：干麸皮和水分别灭菌，带冷却后，吸取种液5mL种液接入水中混匀，再将含菌水接入麸皮，搅拌均匀。 方式二：湿麸皮灭菌，冷却后接入种液5mL，搅拌。 两种接种方式的优劣 3.2 最适培养基的选择 配方A：稻壳6g，细麸皮14g，葡萄糖0.8g， 酵母粉0.4g，KH2PO4 0.2g，CaO 0.1g，水15ml 配方B：中麸皮18g，豆饼粉2g，KH2PO4 0.2g，CaO 0.1g，水15ml 配方C：稻壳2g，细麸皮16g，豆饼粉2g，硫酸镁 0.01g，硫酸锰0.002g，水15ml 配方D：中麸皮18g，豆饼粉2g，硫酸镁 0.01g，硫酸锰0.002g，水15ml 配方E：中麸皮20g，水15ml 五种培养基的活菌数和芽孢数 3.3 10株菌的单独固态发酵 3.4 M5与酵母、米曲霉的混合固态培养 实验方法： 吸取M5种液5mL，酵母种液5mL，米曲霉孢子悬液1mL，加入10mL无菌水中，混匀后接入25g麸皮培养基。30℃培养48h。 小结： M5的活菌数增至2.3×108/g，芽孢数增至6×106/g，酵母菌也有生长，但是米曲霉未见生长。 第4章 M系列10株菌的生理生化特性 第5章 结论 在液态培养中， 12h内10株菌均到达稳定期，活菌数为1×107个/mL；确定了液态混合培养的不可行性。 选出比较适合的固态培养接种方式，确定固态培养的最佳培养基：中麸皮和水。