医疗器械无菌与初始污染菌检验.ppt

医疗器械无菌试验检查要点指南（2010版） 其它应注意的问题还包括： 生产企业对于供试品的选取、转移过程要采取防止污染措施，确保试验结果的可靠性。选取制作供试品的试验样品时，样品包装须完好无损，尤其是只有一层包装的样品。进入无菌检验室的样品若有两层（或两层以上）包装的，需将外包装在传递窗（或缓冲间）拆除后，传入实验室。 参考资料 参考资料一：常见的名词解释 参考资料二：无菌室空气中菌落数的检查 参考资料三：供试品数量的选择 参考资料四：培养基的制备 参考资料五：培养基的适用性检查 参考资料六：方法验证试验 参考资料七：供试品处理及接种培养基 参考资料八：对照试验 参考资料九：参考标准 无菌试验要点 器具灭菌：所有器具高压灭菌121℃30min， 硫乙醇酸盐流体培养基: 接种前, 培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，30℃ ~ 35℃培养14天。 改良马丁培养基： 23℃ ~ 28℃培养14天。两种培养基要符合无菌性检查及灵敏度检查的要求； 无菌试验要点 供试品包装完好。培养基、供试品消毒后带入无菌室。采用验证过检查方法（直接接种法或薄膜过滤法）在洁净度10 000级下的局部100级区域内，以无菌操作法将规定量的供试品或供试液分别接种至两种培养基中，同时做阴性对照和阳性对照；按规定的温度培养14天。逐日观察并记录。如在培养过程中，培养基出现浑浊，培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中，细菌培养2天、真菌培养3天，观察接种的同种新鲜培养基是否再出现浑浊；或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌。 无菌试验要点 阳性对照管应生长良好，阴性对照不得有菌生长。供试品管均应澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定；若供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定，除非能充分证明试验结果无效，即生长的微生物非供试品所含。 出具试验结果后，所有培养物121℃高压灭菌30分钟处理。 做好相应试验记录。 无菌检验有两种方法：直接接种法、薄膜过滤法 直接接种法:将供试品或其有代表性的各部分直接投放入培养基内培养。 薄膜过滤法:含抗菌、抑菌成分的供试品会抑制某些微生物的生长繁殖,所以用常规方法检查会出现假阴性的结果, 但并不等于产品中没有微生物甚至是致病性微生物。所以采用薄膜过滤法来去除供试品中可溶的抑菌性成分,把细菌等微生物截留在滤膜上,然后再经过处理培养使所含微生物生长繁殖, 从而使微生物检出。 方法验证试验 当建立产品的无菌检查法时，应进行方法的验证，以证明所采用的方法适合于该产品的无菌检查。若产品的组分或原检验条件发生改变时，检查方法应重新验证。 ??????验证时，按“供试品的无菌检查”的规定及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行验证。 方法验证试验 菌种及菌液制备 ：除大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B) 4 4102〕外，金黄色葡萄球菌?、?枯草芽孢杆菌??、?生孢梭菌、?白色念珠菌、黑曲霉同培养基灵敏度检查。大肠埃希菌的菌液制备同金黄色葡萄球菌。 方法验证试验与灵敏度检验所有菌种区别：大肠埃希菌代替铜绿假单胞菌。 方法验证试验 取每种培养基规定接种的供试品总量按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于100cfu的试验菌，过滤。取出滤膜接种至硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基中，或将培养基加至滤筒内。另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。按规定温度培养3天~ 5天。各试验菌同法操作。 方法验证试验：薄膜过滤法 方法验证所用菌种 （药典2010版规定） 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌 白色念珠菌 黑曲霉 分别接种各菌种新鲜培养物至相应培养基中培养，将培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成菌悬液（浓度小于100cfu/mL） 硫乙醇酸盐流体培养基8支：分别接种小于100cfu的金葡、大肠、枯草、生孢各2支，其中1管接入每支培养基规定的供试品接种量，另1管作为对照，培养3天。 改良马丁培养基4支：分别接种小于100cfu的白念、黑曲霉各2支，其中1管接入每支培养基规定的供试品接种量，另1管作为对照，培养5天。 方法验证试验：直接接种法 与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检查法和检查条件进行供试品的无菌检查。如含供试品的任一容器中微生物生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用