乳酸杆菌表面蛋调控肠上皮细胞粘附及其生物学意义.pdfVIP

乳酸杆菌表面蛋白调控肠上皮细胞粘附及其生物学意义 摘要 目的和意义： 应用生物信息学及克隆表达的方法对乳酸杆菌表层粘附蛋白进行筛选和鉴 定，并通过抗体封闭及竞争粘附的手段对目的蛋白的粘附作用作进一步的验证。 根据肠上皮细胞模型(Caco-2细胞)在单独使用致病性大肠杆菌(EPEC)感染， 加用乳酸杆菌或粘附蛋白后的生物学功能改变的不同，包括单层细胞的完整性和 通透性、紧密连接(Tight 达差异，阐述乳酸杆菌及粘附蛋白对肠上皮细胞紧密连接蛋白及其生物学功能的 调控机制。 研究方法： 1、运用生物信息学及克隆表达的方法鉴定和筛选乳酸杆菌表层粘附蛋白； 2、通过同EPEC竞争粘附肠上皮细胞，结合抗体封闭的手段验证目的蛋白的粘附 作用； 3、采用免疫荧光、Westernblot方法观察EPEC、乳酸杆菌或粘附蛋白对肠上皮 蛋白分布变化的影响； 化； ERS电阻仪测定单层细胞跨膜电阻值(TER)的变化；用高效液相 4、用Millipore 色谱法(HPLC)测定甘露醇溶液的透过率间接反映单层细胞的通透性； 5、结合ERK表达水平的改变，分析乳酸杆菌对肠上皮TJ蛋白的调控机制 6、所有数据采用均数±标准差表示，PO．05提示差异有统计学意义，采用