人肥大细胞羧肽elisa检测方法的建立及其真核表达载体的构建.pdf

中文摘要 【目的】 odl 1．建立人肥大细胞羧肽酶(hum觚mastc砌)0xyp印tid嬲e，llMC·CP)的双 抗体夹心ELISA检测方法。 2．构建11Mc．cP真核表达载体。 【方法】 1．hMC．CP的ELISA方法的建立 (1)按方阵滴定法进行双抗体工作浓度的确定 (2)重复性实验 (3)灵敏度实验 (4)利用上述建立的ELISA方法，检测临床血清标本中的hMC．CP。 2．hMC．CP真核表达载体的构建 (1)设计特异引物，扩增完整的hMC．CP编码区基因，亚克隆入真核表 达质粒pcDNA3．1，构建llMC．CP真核表达载体。 (2)设计特异引物，用人免疫球蛋白1c链的信号肽编码序列置换 hMC．CP基因自身信号肽编码序列，扩增产物亚克隆入真核表达质 粒pcDNA3．1，构建hMC．CP分泌型真核表达载体。 【结果】 1．成功建立了hMC．CP的双抗体夹心ELISA检测方法。 2．用建立的ELISA方法初步检测了尘螨过敏患者的血清和正常对照者的血 清，结果显示尘螨过敏患者血清中枞c．CP的