人血清脂联素定elisa检测方法的建立及初步临床应用.pdf

摘 要 目的：利用基因工程技术，克隆、表达和纯化具有生物活性的人 脂联素球状结构域(gAPN)重组蛋白，建立一种简便、快捷的检测 讨其与冠心病(CHD)的关系。 方法：1．利用基因克隆技术，构建表达质粒pET22b．gAPN，在 原核表达系统大肠杆菌中重组表达、纯化人gAPN重组蛋白，并通过 观察链脲佐菌素(STZ)诱导的高血糖小鼠模型血糖改变验证其生物 学活性。2．用抗APN单克隆抗体包被微孔板，10％d、牛血清为封闭 液，另一针对APN不同抗原表位的单克隆抗体生物素化后作为检测 抗体，联合生物素．链霉亲和素信号放大系统，以重组的gAPN蛋白 为标准品绘制标准曲线，建立检测人血清APN浓度的定量ELISA方 平，经冠状动脉造影结果确诊CHD患者共103例，非CHD患者58 例，进一步分析血清APN与CHD发病、冠状动脉病变狭窄严重程度 及CHD危险因子之间的关系。 Western印迹鉴定其具有抗原活性，且该蛋白具有降低高血糖小鼠模 型血糖的生物学活性。2．成功建立了检测人血清APN含量的ELISA 方法。该检测方法的灵敏度为150pg／ml，血清检测准确性、特异性、 线性、重复性好，回收率为91．O％．108．O％。与国内深圳依诺金科技 有限公司的人APN浓度ELI