十二指肠钩虫蛋酶抑制剂ad-kpi-2、ad-api-1的克隆及其表达研究.pdfVIP

其表达研究 摘 要 【目的】 在实验室前期分离获得十二指肠钩虫融lIlitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂 Ad．KPI．2(G铋e；b锄k登录号：EF 495070)及天冬氨酸蛋白酶抑制剂Ad枷I．1 (G锄eballl【登录号：EF 的氨基酸序列进一步进行生物信息学分析；构建Ad．KPI．2及Ad．API．1成熟肽原 核表达系统，在大肠杆菌(E．∞厅)中融合表达Ad．KPI．2及Ad．APl．1，并分离 作用机制。研究结果将为进一步研究Ad-KPI．2及Ad．．API．1的生物学功能并探讨 它们在致病中的作用奠定基础。 【方法】 1．Ad．KPI．2和Ad．API．1的生物信息学分析 运用生物信息学软件分别对Ad．KPl．2和Ad．API-l的编码序列进行分 析，预测编码蛋白的结构及理化性质。 2．A．d．Ⅺ，I．2、Ad．API．1的原核表达载体的构建、表达及纯化 序列，相应编码序列经双酶切后分别连接到表达载体pE■32a中，经鉴定正确的 表达重组融合蛋白Ad．KPI．2、Ad．API-l用Ni亲和层析柱进行纯化备用。 3．Ad．KPI．2的活性测定 运用发色底物法检测重