小鼠gitrl白对cd4lt;#39;+gt;cd25lt;#39;+gt;t细胞功能影响的初步研究.pdf

江苏大学硕士论文 摘 要 目的： 体外表达小鼠糖皮质激素诱导的TNF家族相关配体(mGlTRL)， 达小鼠Foxp3蛋白(mFoxp3)，并制备多克隆抗体。 方法： l双酶切PCR产物和真 mGITRLa。45．173基因的PCR产物；坛llI、pt 核表达质粒pDisplay，连接酶切产物，转化至感受态EcD厅DH5a； 选择阳性菌株，抽提重组质粒，坛llI单酶切及PCR进行鉴定质粒。 使用脂质体介导法转染HEI293细胞，培养48小时后收集细胞培养 westemblot进行鉴定。 (2)免疫磁珠法分离小鼠脾脏来源的CD4+CD25+T细胞、 CD4+CD25。T细胞，以及人CD4+T细胞；流式细胞术检测小鼠 江苏大学硕士论文 核蛋白加入小鼠CD4+CD25+T细胞培养体系，在不同时间收集细胞， 变化，Westem blot检测Foxp3蛋白表达变化。 I、勋lI双酶切PCR产物和原核 Fo