尿激酶介导的肿靶向性rhtnf-α原核表达质粒的构建、表达及生物活性研究.pdf

尿激酶介导的肿瘤靶向性rhTNF-Q原核表达质粒的构建、 表达及生物活性研究 中文摘要 【目的】 1．应用基因工程技术，初步实施hTNF．a靶向改造方案，将本课题组已经构 替换，构建出带有foldon序列，uPA底物序列和hn虾．Q突变体基因的4种的 并实现在大肠杆菌Ros甜ac2(DE3)中的高效表达； 2．初步确立n1TNF．a融合基因表达产物的纯化的最佳方案，获得四种dln师 吨融合蛋白的初步纯化产物。 3．验证尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)对融合蛋白的去封闭效果。 4．去封闭融合蛋白生物学活性的初步研究 ～ 【方法】 1．重组pE，r42a(+)-foldon质粒的构建 序列分析，筛选出序列正确的质粒并命名为重组pET42“+)．foldon。 2．重组pET42a(+)-foldon—uPA-h1’NF质粒的构建 1)用PCR方法扩增得到带有uPA底物序列和hTNF．a突变体基因的融合基因 序列。 2)将扩增的融合基因序列产物克隆连接至pET42a(+)．foldon质粒中，转化， 筛选阳性克隆。