无菌检查法演示实验.ppt

无菌检查法演示实验抗生素室 易大为辽宁省药品检验所 提纲 1.定义 2.常见检验品种 3. 4.培养基及培养基的适用性检查 5.稀释液以及冲洗液 6. 无菌检查法实例 7.方法学验证试验 1.定义:系指用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。 符合规定的意义: 仅表明了供试品在该检验条件下未发现被微生物污染。 2.常见检验品种 注射剂 (水针、粉针、油乳注射剂） 眼用以及非注射产品 （手术、烧伤、严重创伤面给药制剂） 无菌封装的原料药 医疗器具和医用材料 3.培养基 硫乙醇酸盐流体培养基 30～35℃ 红色氧化层（h＜深度的1/5）， 100℃水浴加热除去氧化层， 时间不超过20分钟 改良马丁培养基 23～28℃ 沸水浴加热10min 4. 培养基的适用性检查 无菌性检查 每批培养基随机取不少于5支（瓶）,培养14天,应无菌生长。 灵敏度检查 硫乙醇酸盐流体培养基 12ml，9支，4种菌，35 ℃培养3天； 改良马丁培养基 9ml，5支，2种菌，25 ℃培养5天。 结果判断:空白管应无菌生长,加菌管均生长良好 菌液制备（＜100 cfu/ml 的菌悬液） 生孢梭菌64901 5.稀释液以及冲洗液 0.1%蛋白胨水溶液 ——稀释液 （如果蛋白胨溶液浑浊，应过滤） 聚山梨酯80-0.1%蛋白胨水溶液 —— 非水溶液制剂供试品的冲洗 十四烷酸异丙酯 ——膏剂和粘性油剂的溶剂 ，膜滤除菌 6.供试品的无菌检查 明确检验数量 与检验量 根据供试品的情况，确定检样数量 批出厂or上市抽检； 固体制剂or液体制剂； 直接接种法or薄膜过滤法 参考药典附录90-91页表1，表2，表3 示例：红霉素眼膏——无菌检查 检验流程：取规定量供试品 已知信息： 上市抽检样品 膏剂和粘性油剂供试品 规格：2.5g：12.5mg红霉素 薄膜过滤法（阳性对照增加1/2最小检验量） 依据以上的检品信息，查表3确定最少检验数量以及最少取样量 本品装量2.5g ：300mg≤ M ＜ 5g 最少检验数量—— 供试品 + 阳性对照： 10 + 5 = 15 支 每支最少取样量 ：150mg 每支实际取样量：1g左右 （约为装量的2/5） 共计的接入量——15克左右 十四烷酸异丙酯的用量约为供试品总接入量的1倍～2倍左右。 作用：溶解膏剂中的凡士林，使红霉素分散均匀。 十四烷酸异丙酯实际用量25ml 萃取液：0.1%蛋白胨水溶液200ml 冲洗液：（检细菌、检真菌、阳性对照） 0.5%聚山梨酯80-0.1%胨水溶液2100ml （阴性对照：冲洗液400ml） 小结： 薄膜过滤法： 阳性对照增加1/2最小检验量 检验数量： 15支，每支取样1克，总接入量15克 冲洗液用量：2100ml，（700ml/筒） 阳性对照—金黄色葡萄球菌（＜100 cfu ） 供试品 阴性对照 硫乙醇酸盐流体培养基 改良马丁培养基 结果判断 规定温度，培养14天 供试品 a.无菌生长，同时阳性管有菌生长 符合规定 ? √ b.有菌生长 不符合规定 Χ c.试验结果无效，须复试 设备环境原因 试验过程染菌 阴性管有菌生长 无菌操作不当 d.阳性管规定时间内无菌生长 （2~3天内 ） 须重新进行方法验证 7.方法学验证试验 当供试品为新的产品或供试品的组分、检验条件发生改变时， 需进行方法学验证 直接接种法 （6个菌株） ——考察供试品是否有抑菌作用 薄膜过滤法 （选择供试品对其生长有抑制作用的菌株做方法学考察）——考察冲洗量以及其他灭活方法的效果 直接接种法 （方法学验证试验 ） 取红霉素眼膏一支，无菌操作取出全部内容物，移入含适宜乳化剂的稀释液中，充分混合，作为供试液； 量取一定体积供试液（相当于固体取样量150mg）置相应的培养基中；(改良马丁） 接入相应的试验菌 （黑曲霉 or 白色念珠菌） 同时做阳性对照 25℃培养3～5天，逐日观察 结论1: 红霉素对黑曲霉生长无抑制作用. 红霉素对白色念珠菌生长无抑制作用. 薄膜过滤法——考察冲洗量 （方法学验证试验 ） 试验菌： (1)生孢梭菌64901 (2)铜绿假单胞菌10104