低密度脂蛋白受体相关蛋白伴侣蛋白(LRPAP1)基因克隆及表达载体构建.pdfVIP

·中文论著摘要· 低密度脂蛋白受体相关蛋白的伴侣蛋白(LRPAPl)的 基因克隆及表达载体的构建 目 的 心脑血管疾病一直以来困扰着人类的健康，而动脉粥样样硬化是其主要的病 理基础，对动脉粥样硬化分子机制的深入研究，对心脑血管疾病的预防及治疗有 着重要的意义。近年来有研究发现，氧化型LDL(oxLDL)参与了动脉粥样硬化的 形成，而LDL的氧化过程需要低密度脂蛋白受体相关蛋白(U冲)的参与。低密度 脂蛋白受体相关蛋白(LRP)是一种内吞蛋白，属于低密度脂蛋白受体(LDLR) 基因家族。低密度脂蛋白受体相关蛋白的伴侣蛋白即受体相关蛋白(receptor associated 族受体由内质网向胞膜运输、正确折叠成熟及成熟过程中免受其他配体结合的攻 击起至关重要的作用。RAP与LRP有高度的亲和性，当RAP与LRP结合时，能 够阻止LRP与其它所有已知配体的结合／摄取。RAP已成为研究LDLR家族受体 的良好工具。本实验旨在获得大鼠低密度脂蛋白受体相关蛋白的伴侣蛋白 (L脚1)的基因克隆及表达载体的构建。为更好的了解LRP与LDL的氧化过 程的关系，进一步探讨动脉粥样硬化与脂类代谢之间的关系提供一种有利的工具 蛋白。 方法 体，转化感受态菌DH．5ct，挑取阳性克隆，质粒提取试剂盒提取质粒，测序验证。 齄 毋 耋日7R 经测序证实成功构建编码HisTag-LRPAPl融合蛋白的表达载体。 讨论 本实验从大鼠的肾上腺嗜铬纲滤瘤Pcl2细胞中，获得霉盼基因RAP的全长片 段，将全长片段与表达质粒pcDNA3。1+连接，并进行扩增，提取出含有目的基因 的质粒，为进～步的蛋白表达做好铺垫。 本实验在萼l物设计时直接去除了蟊豹基因5’端的信号款序列，同时在主下游 引物的两端加入了酶切位点5q-Iindm和3’XhoI，两端的酶切位点备加入3个保护 碱基，确保了双酶切的效率及在插入质粒pcDNA3．1+时的方向性，对于下～步蛋 白的正确表达打好基础。同时在引物设计时加入了6个缰氨酸牟列，梵下一步蛋自 的纯化散了保证。 RAP作为多种脂蛋白受体的伴侣分子和配体，对研究受体的结构与功能具有 重要作用，同时RAP也与某些疾瘸的发生有关，阿应用于如膜性肾病、老年性痴呆 等疾病的相关研究。本研究成功构建RAP，以此为基础可以表达_RAP，进一步可以 利用RAP来纯化LDLR家族的受体片段，为有关研究提供一种良好的工具。 拿口结论，匕 成功构建编码I-IisTag-LRPAPI融合疆自的质粒载体，将来可用于寞核表达此 融合蛋白。 关键词 动脉粥样硬化；低密度脂蛋白受体相关蛋囱的伴侣蛋I刍(LRPAPl)；脂蛋白 2 ·英文论著摘要· TheConstructionoftheRecombinantPlasmidand Gene ofLow CloningDensityLipoprotein ProteinAssociatedProtein1 Receptor—-related obiective health Cardiovascularandeerebrovasculardiseaseshavebeen the of plaguing atherosclerosisare mainfoundationthe of human the of