棉铃虫谷胱甘肽S转移酶的诱导表达及基因克隆.pdf

摘要 反麻的最适条件、植物次生物质和杀m药剂对GSTs的体外抑制作用、GSTs在棉铃虫不同 鳃织嚣富中躲表达差黪、疆物次生物缓对GSTs诱导表达进行7磺窥。莠瓣GSTs进萼亍了部 分纯化及同功酶分析，对GSTs基因进行了克隆和序列分析。 为50℃，而脂肪体GSTs为45℃；酶含量过大f总蛋融含量60 ligfmI)对GSTs酶促反膨 (GSHSmM，CDNB2mM)对酶健反应其有褥l髓佟搦。 单宁酸、槲皮素和芸香静三种植物次生物质对棉铃虫GSTs的CDNB轭台活性具有搬 强弱季露剿终鞘，毽攀宁酸与CDNB为竞争蛙舞铡，撬{疲素为饕藏争蛙鞠澍，嚣芸香瞢为混 合性抑制。谯0．1mM的浓殿下，有机磷利氨基甲酸睛类药剂对棉铃虫GSTs的抑制率在 20．35％之间，嚣投除啦蔫酯则几乎没有搀剁作用。麴潮率随抑剃刹浓攫的增热蘅增大。 棉铃虫GSTs在不同组织的表达籍异很大。中肠、脂肪体、头部剃体壁的酶比活力分 6和150．5 别为55,1，9、412，6、286rlmollrng proImin。与室幽敏堪种群捆比，田闻种群中中肠GSTs 的眈活力增加了66％，但脂脐体GSTs活性没有显著麓异。棉铃虫不同维织、不同种群酶 GSTs对CDNB和GSH的亲和力都没有显著蕊别。 粥2．十三烷酝、瓣皮素誊l荜宁酸诱导4sh磊，端铃虫中肠GSTs的ist活力都有不圈程 度增加．而脂肪体GSTs的比活力都有所降低；它们与底物的亲和力都没有明鼹改变，内 源缓GSH斡食量也没鸯鹌显嶷诧。表鹳三秘穗甥攻生物质对撼铃虫GSTs的诱嚣主要楚g| 起GSTs的表达量改变．可能没有引越同功酶组成的变化。 从l龄树嬲幼虫舞娥用0．005％舱单宁酸处理棉铃嫩幼虫，对5龄荆6龄幼虫GSTs的 活性有明显的抑制作用，眈活力分别为对照的0．59和0．67倍。低栽撬、短对闯处理，可 诱导棉铃虫幼虫中肠年『}脂舫体中GSTs的活性增加，躏剂量或低剂量长时间处理没有诱导 增加作用，箍至还鸯都制俸弼。荜守酸连续赴淫4代，对串弱GSTs均表嚣誊簦铡作用，瓣 脂胁体GSTs无显著影响或有抑制作川。 耀GSH。Sepharose PAGE结果照示，棉铃虫中肠含有3个GST同功酶，而脂肪体则有5个同功酶，它们弧基 静分子萋翊瓣裴楣议，约30kD。单％。酸处理对拣铃虫GST∞弱功酶缌残没有澎晌。 根据鳞翅目昆虫中已发表的I类和llI类GST基因的保守序剿设计…对引物，熠RT-PCR 方法从槁铃威中肠嚣i指肪体中分别克隘出219 3’．RACE的方 bp的GST基因片“段，然后JH 法克隆出3’端全跃净列。共获褥3条743 bp酶GST蒸因片段，编码198个氨蒸酸。系统 分析的结果淡明，邈三条基闲片段均属于昆虫111(Epsilon)类GST基陋l。 关键词：棉铃虫；谷胱甘肽-s转移酶：植物次生物质；诱导；杀虫药剂：基因 壳戆 Abstracts and between Biochemical allelochemicals differences by expression properties，induction tissuesor ficationand of strains，purl genecloningglutathione bollworm studiedincotton d，migel‘a(Hfibner)。 Helicoverpa was in and9infat