肝癌细胞中rha小干扰rna载体的构建与鉴定.pdfVIP

摘要 原发性肝癌发生率高，手术切除是主要的治疗方法，但肝癌术后复发率高，术后复发 已成为影响患者预后的主要问题。肝癌侵袭转移是主要的影响因素之一，深入研究肝癌侵 袭转移机制对于改善肝癌患者的总体预后有重要作用。Rho家族属于Ras超家族，是重要 的细胞内信号分子，在细胞的许多基础生命活动中起关键的作用。Rho蛋白和肿瘤发生有 密切的关系，参与肿瘤的浸润和转移过程，目前研究证实，在结肠癌、乳腺癌、肺癌、头 颈癌、肝癌等有RhoA表达的异常增高。本研究利用RNA干扰技术干扰RhoA蛋白的表达， 干扰信号转导途经，为进一步研究肿瘤细胞应力纤维变化，变形、移动、粘附和侵袭能力 改变提供实验模型，最后了解RhoA和肝癌侵袭转移的关系。 本研究主要包括以下两个部分内容： 第一部分：构建干扰RhoA的shRNA真核表达载体 RNA，shRNA)表 目的：利用pGenesil-1质粒构建针对RhoA的短发夹RNA(shorthairpin 达载体。 方法：设计2个shRNA结构的互补DNA序列，经退火成双链， 段，T4DNA 码序列与设计的片段完