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第七章 放射免疫技术 第一节　放射免疫技术 一、原理及分类 二、常用的放射性核素 三、标记物制备及鉴定 四、抗血清鉴定 第二节　放射免疫分析 一、基本原理 二、实验方法及测定 第三节 免疫放射分析 一、基本原理 二、IRMA与RIA的比较 早期的放射免疫技术是基于竞争性结合反应原理的放射免疫分析(RIA)，稍后又发展了非竞争性结合的免疫放射分析(IRMA)。该类技术具有灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便且易于标准化等优点，广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域中各种微量蛋白质、激素、小分子药物和肿瘤标志物的定量分析，对相关学科的发展起到了极大地推动作用。 （二）放射性核素125I 放射性核素125I是最常用的放射免疫技术标记物。 优点：①化学性质比较活泼，标记方法简单，且容易获得高比活性的标记物；②在衰变过程中发射γ射线，便于测量而且测量的效率高；③半衰期（60天）适中，试剂盒有一定的使用期，废弃物的处理也比较容易。 缺点：①用125I取代H会改变原物质的化学结构，有可能影响原物质的免疫活性； ②比较容易发生辐射损伤而使标记抗原变性；③标记物只能应用6~8周，对商品化的试剂来说，其产品的货架期较短。 二、放射标记物的制备 （一）抗原（抗体） 1、用于放射性碘标记的抗原应该是高纯度抗原，蛋白质抗原可直接进行标记，非蛋白质抗原或半抗原（甾体激素和药物分子）需要进行必要的修饰才能用放射性碘标记。 2、用于放射性碘标记的抗体应选用高亲合力和高效价的抗体，可以是多克隆抗体，也可是单克隆抗体。抗体必须保证较高纯度和较高效价，对于多克隆抗体必须保证较高特异性。 放射免疫分析技术的灵敏度高、特异性强、精密度好, 常用于各种激素、微量蛋白质、肿瘤标志物和药物等微量物质的测定。但由于放射污染和危害，常用核素半衰期短，试剂盒稳定期不长等诸多不足, RIA将逐渐被取代。 1.放射免疫技术的核心是什么？ 2.制备放射性125I标记物的基本原理是什么？有哪些方法？ 3.评价125I标记物质量的指标有哪些？ 4.用于放射免疫技术的抗体应满足哪些质量标准？ 5.放免分析中标记/未标记抗原、抗体的用量特点及与免疫复合物的量变关系？ 6.反应结束后，如何将免疫复合物与游离标记物分离开？ 7.放射免疫分析实验中，如何确定待测抗原的含量？ 8.免疫放射分析与放射免疫分析的反应原理有何不同？ 9.γ闪烁计数器记录的信号即是放射核素的衰变吗？ 10.灵敏度、特异性和测定范围，免疫放射分析与放射免疫分析有何区别？ 放射免疫技术的基本原理是放射性核素可探测的灵敏性、精确性与抗原抗体反应的特异性相结合，主要包括RIA和IRMA。RIA所用的标记物应具备高比活度、高纯度和完整的免疫活性；抗血清应具有较高的抗体亲和力、高度的特异性和适宜的工作滴度；标准品浓度需按标准进行标定；结合与游离反应物的分离（二抗法、PEG法、PR试剂法和固相法）应彻底、迅速、不影响反应平衡、非特异性低和操作简便。拟合标准曲线需根据不同检测项目和不同的要求选用恰当的反应参数。 一、免疫放射分析－基本原理 以过量125I标记抗体与待测抗原进行非竞争 性免疫结合反应, 用固相免疫吸附剂对B或F 进行分离，其灵敏度和可测范围均优于RIA 操作也较RIA简单。 单位点 IRMA 先用过量标记抗体与 待测抗原进行反应，形成 抗原抗体复合物；用固相 抗原结合未结合标记抗体 并将其分离, 测定上清液 的放射量 双位点 IRMA 先用固相抗体与抗原结 合，再用过量的标记 抗体与抗原的另一决定 簇结合，形成固相抗体- 抗原-标记抗体复合物， 洗弃剩余标记抗体，测固相上放射性。 二、IRMA与RIA比较 放射免疫分析技术的应用 思考题 小 结 * 思考题 小结 1959年Yalow和Berson在研究胰岛素和胰岛素 抗体的免疫反应时，首先将放射性核素高敏感 的示踪特点和抗原抗体反应的高特异性特点相点相 结合，实现了血浆胰岛素的定量分析，创立放射免 疫分析（radioimmunoassay,RIA）。 1968年Mila和Hale将放射性核素125I标记在抗体 上，采用固相吸附方式进行未结合标记的分离，创立 免疫放射分析（IRMA）。放射免疫分析技术开创 了体液微量物质定量分析的崭新领域，并为其他标记 免疫分析奠定了基础。 概 述 免疫技术：以抗原-抗体反应原理为基础，对样品中相应抗原或抗体进行检测。 标记技术：将可被探测的示踪物质用化学方法与化合物连接。 标记免疫分析：用可微量或超微量检测的示踪剂标记抗原、抗体，检测免疫反应结果并确定待检物。 标记免疫技术－基本概念 常见标记免疫技术 放射免疫技术 酶免疫技术 荧光免疫技术 第