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第三章 动植物细胞培养产酶 第一节 动植物细胞中酶生物合成 的调节 第二节 植物细胞培养产酶 第三节 动物细胞培养产酶 第一节 动植物细胞中酶生物合成的调节 1.细胞分化改变酶的生物合成（端粒酶） 2.基因扩增加速酶的生物合成（中国田鼠P66） 3.增强子促进酶的生物合成（胰岛素基因的增强子） 4.抗原诱导抗体酶的生物合成 抗体酶 诱导法（半抗原诱导法 酶蛋白诱导法） 第二节 植物细胞培养产酶 植物细胞培养主要产物？ ——色素、药物、香精、酶等。 思考：植物细胞的特性？ ⑴体积大 ⑵生长速率和代谢速率比微生物低 ⑶营养要求简单 ⑷要求一定的光照时间和光照强度 ⑸对剪切力敏感，这在生物反应器的研制和培养过程通风、搅拌方面要严加控制 ⑹目的产物不同 二、植物细胞培养的特点 1、提高产率 实例 日本三井石油化学工业公司于1983年在世界上首次成功采用紫草细胞培养生产紫草宁，750L反应器，培养23天，细胞中紫草宁的含量达到细胞干重的14％，比紫草根中紫草宁的含量高10倍。 P70 紫草是我国传统中草药，其中的有效成分为一系列萘醌类化合物，具有凉血、活血、解毒和透疹的作用。用于子宫颈炎、外阴炎、尿布性皮炎、中耳炎、烫伤、刀伤、湿疹、水疱及其他皮肤病。紫草辅助米非司酮可提高流产成功率。具有抗垂体促性腺激素的作用，可以用于经期综合征，可以预防麻疹，有消肿作用，避孕作用。 其中紫草宁具有抗肿瘤及活性，对Ｈｅｌａ细胞增殖有一定的抑制作用。减少自发性乳癌的发病率，对肝癌和Ｌｅｗｉｓ肺癌有一定的放射增敏作用。紫草宁可以提取红色素，紫草油以及紫草可生产紫草ＳＯＤ等紫草系列保健品。可以作为如化妆品口红、胭脂、粉饼、食品饮料、熏肉、医药胶囊、防晒制品及印染等着色剂和添加剂。 大规模细胞培养生物反应器???? ?市场?前景及经济效益分析?:以年产能力50公斤紫草宁为例，国际市场价（精品干粉）每公斤价格为5000-7000美元，预计每年新增利税25-35万美元。除此之外，紫草宁因其色泽鲜艳，附着力强被国际誉为红色素之王，可作为保健食品、保健饮品、保健化妆品的添加剂。? 2、缩短周期 细胞培养倍增时间一般为12～60h，一般生产周期15～30d，与完整植株比较，大大缩短了生产周期。 3、易于管理，减轻劳动强度 4、提高产品质量 产物浓度较高，杂质少；污染少，易于分离纯化。 5、缺点 与微生物相比，植物细胞对剪切力敏感，生产周期长，需光照。这些会在植物细胞生物反应器的设计和工艺条件控制等方面引起一系列的问题，必须考虑和解决。 三、植物细胞培养产酶的工艺条件及其控制 （一）、工艺流程 外植体------细胞获得（直接分离、诱导愈伤组织等 ）-------细胞培养-------- 分离纯化 --------酶 植物细胞的获取 直接分离法 诱导愈伤组织诱导法 原生质体再生法 （二）、植物细胞培养的培养基 1、植物细胞培养基的特点 分析几种常用的植物细胞培养基，说明 植物细胞培养基的特点 ？ 植物细胞培养产酶实例 据报道，已经研究过200多种植物细胞培养，其产物超过400中。其中通过植物细胞培养产生的酶有10多种。 阅读大蒜细胞培养生产SOD实例，说明植物细胞培养产酶工艺过程及条件控制。 SOD是催化超氧负离子进行氧化还原反应的氧化还原酶，具有抗辐射、抗氧化、抗衰老的功效。SOD可以从动物、植物和微生物细胞中提取分离得到。郭勇教授从1992年开始进行大蒜细胞培养生产超氧化物岐化酶的研究取得可喜成果。工艺过程简介如下。 1、大蒜愈伤组织的诱导 选取结实、饱满、无病虫害的大蒜蒜瓣，在4℃冰箱中放置3周，以打破休眠。去除外皮，先用70％乙醇消毒20s，再用0.1％氯化汞消毒10min，再用无菌水漂洗3次。 在无菌条件下，切成0.5cm的小块，植入含有3mg/L2，4－D（2，4－二氯苯氧乙酸）和1.2mg/L6-BA(苄基酰嘌呤)的半固体MS培养基中，25℃，600lux,12h/d光照的条件下培养18d，诱导得到愈伤组织。 光照度与勒克斯：光照度是表明物体被照明程度的物理量。光照度与照明光源、被照表面及光源在空间的位置有关，大小与光源的光强和光线的入射角的余玄成正比，而与光源至被照物体表面的距离的平方成反比。光照度可用照度计直接测量。 光照度的单位是勒克斯，英文lux的音译，也可写为lx 。被光均匀照射的物体，在1平方米面积上所得的光通量是1流明时，它的照度是1勒克斯。有时为了充分利用光源，常在光源上附加一个反射装置，使得某些方向能够得到比较多的光通量，以增加这一方向被照面上的照度。例如摄像、摄影照明灯、手电筒和汽车前灯等都装有反光镜。 以下是各种环境照度值：单位 lux黑夜 0.001 - 0.0