nrf2在实验自身免疫性脑脊髓炎小鼠中表达及莱菔硫烷保护作用机制研究.pdf

中文摘要 Nrf2在实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中表达 及莱菔硫烷保护作用机制研究 摘 目的：多发性硬化(multiple 症性脱髓鞘疾病，目前其发病机制尚未完全明确，近年来许多研究表明， 外源性与内源性亲电子物质所引起的氧化应激是多发性硬化脑损伤的重 要机制之一。细胞内氧化物质具有氧化性，可导致细胞死亡，因此细胞启 动抗氧化应激系统保护神经元。Nuclear 2relatedfactor factor-erythroid 2(Nrf2)为可与抗氧化反应元件(antioxidantresponse 转录因子，其结合后可启动内源性抗氧化系统产生多种抗氧化酶，从而抑 酸盐，以其前体萝卜甙形式广泛存在于十字花科植物中，多项研究证实， 路可对EAE产生保护作用。莱菔硫烷对EAE的保护作用尚未有研究证明， 莱菔硫烷诱导Nrf2核转位作用较强，副作用小，可透过血脑屏障，腹腔 注射可被吸收，所以选择SFN进行试验，并与目前临床常用药物地塞米 以此证明SFN是否对MS有治疗价值。 autoimmune 织中Nrf2及丙二醛(MDA)的表达水平，应用莱菔硫烷与地塞米松干预， 观察莱菔硫烷与地塞米松对神经功能缺损评分、Nrf2和MDA的表达的影 响，探讨Nrf2和MDA的表达规律与莱菔硫烷对EAE的保护作用。 方法： 每个亚组10只小鼠。 中文摘要 合，乳化后按每只0．1ml于小鼠脊柱两侧分四点皮下注射，免疫当天即第 在乙醚麻醉及充分固定下进行。SFN组与DXM组在免疫后第一天起分别 给予相应剂量的药物进行腹腔注射，药物隔日注射一次直至动物处死为 止，正常对照组及EAE组小鼠给予等量的生理盐水隔日腹腔注射。分别 在第13天，20天，30天将动物处死，留取脑组织与腰膨大，用免疫组织 化学方法测定Nrf2在蛋白水平的动态表达。用硫代巴比妥酸(TBA)法 测定MDA的动态表达。 3神经功能评分：于动物免疫当日及免疫后每日上午8：oo时下午17： oo时对动物体重、活动状况、精神状态、皮毛光泽度进行观察，并对动 物进行神经功能评分，Benson评分标准：O分：无任何临床症状；1分：尾部 张力消失，可见轻度步态笨拙；2分：双后肢无力，被动翻身后可以恢复； 3分：双后肢瘫痪，被动翻身后不能恢复，但给予刺激后可以挪动；4分： 双后肢瘫痪，前肢瘫痪或肌力减弱伴尿便失禁；5分：濒死状态或死亡。症 状介于两者标准之间者以土O．5计。 4脑组织Nrf2表达的测定：将实验小鼠于免疫后第13天、20天、30 天时麻醉后4％多聚甲醛固定，甲醛固定好后取脑组织，于4％多聚甲醛 中保存24小时，石蜡包埋，组织切片，应用SP法进行免疫组化，光学 显微镜下观察阳性细胞，并计数。 5脑组织丙二醛的测定：将实验小鼠于免疫后第13天、20天、30天 时麻醉后，立即断头在冰盘上快速取脑，剥除硬脑膜，去除小脑、脑干、 额极及脑室周围皮层，在0．-一4℃生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸吸干， 准确称重，按1：9加入冰冷生理盐水制成组织匀浆液，然后在冰浴中超 取上清，置于．70℃冰箱中保存待测。 卜 结果： l动物发病率观察：EAE组、SFN组与DXM组小鼠发病率分别为： 差异有统计学意义(PO．05)。 中文摘要 功能评分均数分别为：2．3 3精神状态与皮毛光泽度观察：EAE组小鼠精神萎靡皮毛黯淡偶有溃 疡，SFN组小鼠精神正常皮毛光滑，DXM组小鼠精神兴奋皮毛暗淡有溃 疡。 4脑组织中Nr亿表达：各组小鼠的Nrf2表达均较对照组上调，发病 达与EAE组比较差异有统计学意义(PO．05) 统计学意义(PO．05)o 结论： ． 显。 ． 2SFN组可以降低EAE小鼠发病率，减轻发病时神经功能损伤程