rnai沉默plβ基因对人卵巢癌细胞增殖活性及对化疗药物敏感性的影响.pdf

摘要 13基因对人卵巢癌细胞增殖活性及对化疗 RNAi沉默pol 药物敏感性的影响 硕士研究生 刘娟芳 导 师 韩丽萍 郑州大学第一附属医院妇产科 郑州市450052 摘要 背景和目的 DNA聚合酶p(DNA excision 同于聚合酶A、B、Y家族。其主要功能是碱基切除修复(Base repair， BER)，在单核苷酸缺口的填补中起重要作用。因为其极高的错配率，被称为生 物进化过程的“看家酶”。 polD参与DNA的损伤修复及跨损伤进行DNA合成。正常情况下在体内成 恒定的低水平表达。现已在人类肿瘤组织标本中如直肠癌、前列腺癌、肝癌、 肺癌、胃癌、膀胱癌、食管癌、胰腺癌、结直肠癌、鼻明癌、乳腺癌等多种癌 中发现DNA polp的高表达。从卵巢J下常组织到癌变的过程中，p01p的表达量逐 渐增加。肿瘤分化程度越低以及临床分期越高其表达量愈强。 RNA干扰(RNA 21—23个核苷酸的双链RNA所介导的序列特异性、转录后基因沉默机制。 迄今为止，据已检索到的文献，国内外尚无运用RNAi技术阻抑卵巢癌细胞 中polB基因表达的相关研究报道。因此，课题利用RNAi技术沉默卵巢癌细胞 中的polD的表达，观察p01p抑制后肿瘤细胞的增殖活性以及对顺铂敏感性的变 化。 摘要 实验方法 利用已构建成功的针对poll3基[]I拘siRNA(small interferingRNA，siRNA)重 组质粒，转染人卵巢癌细胞HO．8910，通过荧光倒置显微镜观察转染效率；同时 mRNA的表达水平；用MTT法观察检测三个实验 检测转染后HO．8910细胞@poll3 组细胞增殖能力变化；台盼蓝染色细胞计数法了解各组细胞对顺铂敏感性的变 化。 实验结果 下可见大量绿色荧光颗粒。 2．转染pollB靶siRNA(pRNAT-U6．1．sipol J3)i拘HO．8910细胞，DNA聚合酶p 基因的mRNA表达水平明显降低，与对照组相比，差别存在高度显著性(P 差异无统计学意义(尸0．05)。 3．48d时后结果显示转染重组质粒sipoll3细胞的增殖速度较未转染细胞及 转染空载体的细胞明显减慢，差异有统计学意义(PO．05)。而转染空载体组与正 常细胞组相比，差异无统计学意义(尸0．05)。 少于转染pRNAT-U6．1细胞组和萨常细胞组。经统计学处理差异具有高度显著性 (PO．01)，随着药物浓度的增加，差别越来越明显，且呈浓度依赖性。 结论 1．转染质粒pRNAT-U6．1一sipolp细胞组、pRNAT-U6．1转染细胞组及未转染细 mRNA 胞组经RT-PCR检测后，表达载体转染卵巢癌细胞后能显著降低细胞pollB 表达。 D后的细胞比对照组及未转染细胞的生长速 2．转染质粒pRNAT-U6．1．sipol 度减慢、增殖活性降低。 3．表达载体成功转染卵巢癌细胞后，细胞对顺铂的敏感性明显提高。 关键词：DNA聚合酶p；小干扰RNA；HO．8910；顺铂；荧光定量PcR II on and to