应用实时荧光定pcr技术结合dna直接测序技术检测dj-1基因突变.pdf

应用实时荧光定量PCR技术结合DNA直接测序技术检测肚， 基因突变 摘要 背景 帕金森病(Parkinsondisease，PD)是一种常见的神经退行性 疾病。其主要临床特征是行动迟缓、静止性震颤、肌强直和姿势平衡 障碍等；主要病理改变是中脑黑质多巴胺能神经元进行性交性坏死、 路易氏(Le町)小体形成。常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征 (autosomal-recessive early 色体隐性遗传方式，发病年龄小于或等于45岁的帕金森综合征。多 巴反应性肌张力障碍(dopa-responsivedystonia，DRD)是一种少 见的遗传性锥体外系疾病，由于部分患者可以出现帕金森综合征样表 显子杂合缺失在内的12种彩1基因的致病突变。在前期工作中，本 研究小组应用聚合酶链反应(PCR)结合DNA直接测序技术对16个 AREP家系、3个DRD家系先证者的刃1基因进行了突变检测，发现 了1个驴，基因的复合杂合突变(A39S)。由于DNA直接测序技术不 能发现基因外显子的杂合缺失或重复突变，因此为了进一步明确 刃。基因在本组AREP和DRD患者中的突变频率，有必要应用基因定 量方法结合DNA直接测序技术进行刃1基因的突变检测。 目的 建立应用实时荧光定量PCR检测占y1基因外显子重排突变的技 证者进行J耵1基因突变检测。 方法 采用实时荧光定量PCR技术检测刃1基因外显子重排突变，结 合DNA直接测序方法检测三旷J基因点突变、小片段插入或／和缺失突 变。设置ALB基因为内对照，建立刃一基因和AZB基因的标准曲线， 根据已建立的标准曲线计算彤。基因和爿衄基因相对于标准品的起 始拷贝数，刃。基因相对拷贝数为刃一基因相对起始拷贝数与舭口 基因相对起始拷贝数的比值。 结果 证者进行刃。基因外显子重排突变检测，发现三旷』基因各外显子相 对拷贝数均在0．8-1．2之间，在目前公认的正常参考范围之内，提示 本组患者不存在三旷一』基因各外显子的重排突变。在前期工作的基础 上，应用DNA直接测序技术对5个AREP家系和3个DRD家系先证者 进行刃一基因点突变、小片段插入或／和缺失突变检测，发现了1 个刃一基因纯合突变：位于J耵。基因第2号外显子29位碱基T被 C替换(T29C)，导致第10位氨基酸由亮氨酸变为脯氨酸(LIOP)； 在其余4个AREP家系和3个DRD家系中未发现石¨基因突变。发现 Ⅱ nucleotide 了刃一基因的3个单核苷酸多态(single polymorphism， 结论 建立了应用实时荧光定量PCR检测彤一基因外显子重排突变的 技术平台，未发现本组AREP家系存在驴J基因重排突变。发现本组 -*g、IVS4+459-*a和IVS4+469-*a。 关键词实时荧光定量PCR，AREP，DRD，刃一基因，突变分析 HI Mutationreal-time forDJ-1 PCRand Screeninggene by direct sequencing ABSTRACT Background Parkinson’Sdisease acommon disorder 0D)is neurodegenerative sufferfrom Clinically,most bradykinesia，restingtremor,rigidity, patients and